Informacija

11.11: Antisense oligodeoksinukleotidai ir jų terapinis potencialas - biologija


Antisense oligonukleotidai yra sintetiniai polimerai. Monomerai yra chemiškai modifikuoti dezoksinukleotidai kaip ir DNR arba ribonukleotidai, tokie kaip RNR. Paprastai jų yra tik 15-20, taigi „oligo“. Jų seka (3 ′ → 5 ′) yra antisense; tai yra, papildo molekulės pojūčių seką mRNR.

Antisense oligonukleotidai yra sintetinami tikintis, kad jie gali būti naudojami kaip terapiniai agentai - blokuojantys ligos procesus, keičiant tam tikro baltymo sintezę. Tai būtų pasiekta prijungus antisense oligonukleotidą prie mRNR, iš kurios šis baltymas paprastai sintetinamas. Dviejų susiejimas gali

  • fiziškai blokuoja ribosomų gebėjimą judėti palei pasiuntinio RNR, užkertant kelią baltymų sintezei;
  • paspartinti mRNR skaidymo citozolyje greitį;
  • išvengti sujungimo klaidų, dėl kurių kitaip susidarytų sugedęs baltymas.

Kad antisense oligonukleotidai būtų naudingi gydant žmones, jie turi turėti galimybę patekti į tikslines ląsteles; vengti virškinimo nukleazėmis; ir nesukelia pavojingų šalutinių poveikių. Norint pasiekti šiuos tikslus, antisense oligonukleotidai paprastai yra chemiškai modifikuoti, kad būtų atsparūs virškinimui nukleazėmis, ir prijungiami prie taikymo prietaiso, pvz., Receptorių tipo ligando, esančio ant norimų tikslinių ląstelių, arba antikūnai, nukreipti prieš norimų tikslinių ląstelių paviršiaus molekules.

Antisense oligonukleotidų naudojimas

Įvairūs antisense oligonukleotidai bandomi kaip galimi ginklai prieš:

  • Hepatito C virusas (HCV). Norint sėkmingai užkrėsti kepenis šiuo virusu, reikia, kad kepenys gamintų tam tikrą mikroRNR (miRNR-122). HCV infekuotų žmonių injekcijos su ODN („miravirsen“), papildančiomis miRNR-122, slopina virusą.
  • ŽIV-1, dažniausia priežastis AIDS Jungtinėse Amerikos Valstijose
  • Ebolos virusas, dažnai mirtinos Ebola hemoraginės karštinės priežastis
  • žmogaus citomegalovirusas (HCMV); kuris dažnai sukelia rimtų komplikacijų AIDS sergantiems pacientams
  • astma; įkvėpus antisense oligonukleotido, nukreipto į GATA3 mRNR (transkripcijos faktorius, skatinantis Th2 atsaką), palengvėja alergine astma sergantiems pacientams.
  • tam tikras vėžiopvz., lėtinė mieloleukemija (LML)
  • tam tikros rūšys uždegimas sukelia ląstelių sukelta imuninė reakcija
  • Diušeno raumenų distrofija (DMD)
  • šeiminė hipercholesterolemija-nukreipta į apolipoproteino B-100 mRNR. 2013 m. Sausio 31 d. Antisense ODN mipomersen (Kynamro®) gavo reguliavimo leidimą naudoti žmonėms, sergantiems šeimos hipercholesterolemija.

Antigenų ir antisense terapija (su diagrama)

Paprastai genų terapija atliekama įvedant terapinį geną, kuris gamina sugedusį ar trūkstamą baltymą. Tačiau yra tam tikrų sutrikimų (vėžys, virusinės ir parazitinės infekcijos bei uždegiminės ligos), dėl kurių atsiranda tam tikrų normalių baltymų perteklius. Šias ligas galima gydyti blokuojant transkripciją naudojant vienos grandinės nukleotidų seką (antigeninį oligonukleotidą), kuri hibridizuojasi su specifiniu genu, ir tai vadinama antigenų terapija.

Antisense terapija reiškia transliacijos slopinimą naudojant vienos grandinės nukleotidą (antisense oligonukleotidą). Be to, taip pat galima slopinti transkripciją ir transliaciją, blokuojant (oligonukleotidais) transkripcijos faktorių, atsakingą už specifinę geno ekspresiją.

Nukleino rūgšties terapija reiškia DNR arba RNR molekulių naudojimą terapiniais tikslais, kaip nurodyta aukščiau. Natūralios DNR ir RNR sekos (su tinkamomis modifikacijomis) arba sintetinės gali būti naudojamos gydant nukleorūgštis. Teoriškai nukleorūgštys gali būti naudojamos kaip terapinės medžiagos. Tačiau didžioji dalis atliekamo darbo yra susijusi su RNR naudojimu antisense terapijoje.

Kai kurie iš jų aprašyti toliau:

Antisense terapija vėžiui:

Onkogenai yra genai, atsakingi už vėžio priežastį. Vyraujantys onkogenai gali būti nukreipti naudojant antisense technologiją, naudojant antisense transgenus arba oligonukleotidus. Antisense oligonukleotidai naudojami mieloidinei leukemijai gydyti jau 1991 m.

Antisense RNR molekulės dažniau naudojamos vėžio gydymui. Šis metodas yra veiksmingas tik tuo atveju, jei antisense oligonukleotidas (antisense mRNR) specifiškai jungiasi prie tikslinės mRNR ir blokuoja baltymų biosintezę (vertimą). Tai galima pasiekti dviem būdais, kaip parodyta 13.9 pav.

Antisense cDNR galima klonuoti ir pernešti į ląsteles. Antisense mRNR sintezuojama transkripcijos būdu. Tai gali lengvai susieti su specifine mRNR ir blokuoti vertimą (13.9A pav.). MRNR iš tikrųjų sudaro genas, kuriame yra egzonų ir intronų per transkripciją, o po to - apdorojimas. Kitas būdas blokuoti vertimą yra tiesiogiai įvesti antisense RNR į ląsteles. Tai hibridizuojasi su tiksline mRNR ir blokuoja vertimą (13.9B pav.).

Antisense mRNR terapija buvo išbandyta gydant smegenų auglį, būtent piktybinę gliomą ir prostatos vėžį. Piktybinės gliomos atveju į insuliną panašus baltymų augimo faktorius I (IGF-I) yra per daug gaminamas, o sergant prostatos vėžiu-į insuliną panašus augimo faktoriaus I receptorius (IGF-IR). Abiejų šių vėžio formų atveju. atitinkamos antisense cDNR gali būti naudojamos antisense mRNR molekulėms sintetinti. Jie savo ruožtu naudojami vertimui blokuoti, kaip trumpai aprašyta aukščiau ir pavaizduota 13.9 pav.

Antisense terapija pagalboms:

Taip pat bandoma užkirsti kelią ŽIV infekcijai, naudojant antisense terapiją. Trumpai aprašomas pagrindinis principas (13.10 pav.).

Tikslinės ŽIV infekcijos ląstelės yra genetiškai modifikuotos, kad jose būtų genas, galintis išreikšti nemokamą ŽIV genomo kopiją. Šis genas gamina antisense RNR. Kai ląstelės, kuriose yra antisense RNR, yra užkrėstos ŽIV, ji jungiasi prie viruso RNR, sudarydama dvigubas RNR-RNR hibridines molekules. Šios dvigubos grandinės molekulės negali naudoti fermento atvirkštinė transkriptazė. Todėl ŽIV genomo DNR kopija negali būti padaryta ir įtraukta į genomą.

Antisense oligonukleotidai kaip terapiniai agentai:

Nustatyta, kad oligodeoksinukleotidai (turintys apie 15–20 vienetų) gali hibridizuotis su specifine mRNR ir blokuoti transliaciją, galutinai sumažindami specifinį baltymą. Oligonukleotidai gali hibridizuotis su skirtingų tipų RNR transkriptais-mRNR, introno eksonais, dvigubomis RNR. Pagrindinis natūraliai esančių oligonukleotidų naudojimo apribojimas yra tas, kad juos skaido ląstelinės nukleazės.

Buvo paruoštos tam tikros nukleotidų modifikacijos (bazės arba cukrus, fosfatas), nedarant įtakos jų hibridizacijos gebėjimui. Tačiau šie modifikuoti oligonukleotidai yra atsparūs skaidymui nukleazėmis. Plačiausiai naudojamas antisense oligonukleotidas turi sieros grupę vietoj laisvo deguonies fosfodiesterio jungtyje. Modifikuota jungtis vadinama fosforotioato jungtimi.

Šie fosforotioato antisense oligonukleotidai yra atsparūs skaidymui nukleazėmis, be to, jie yra tirpūs vandenyje. Kai kurios kitos oligo ir shinukleotidų modifikacijos yra su fosforamidito jungtimi ir 2-0-metilo riboze (13.11 pav.). Modifikuoti antisense oligonukleotidai iš tikrųjų naudojami kaip terapiniai agentai klinikiniuose tyrimuose tam tikrų vėžio, žarnyno ligų, AIDS, maliarijos ir virusinių infekcijų gydymui.

Laisvieji oligonukleotidai lengvai nepatenka į ląsteles. Todėl jie yra kapsuliuoti į liposomas, kad būtų galima efektyviai tiekti, kad slopintų mRNR transliaciją.

Galimas lygiųjų raumenų ląstelių proliferacijos slopinimas:

Lygiųjų raumenų ląstelių proliferacija (kartu su tarpląstelinės matricos sekrecija) yra susijusi su hipertenzija, vainikinių arterijų šuntavimo nepakankamumu, hipertenzija ir ateroskleroze. Yra galimybė lygiųjų raumenų ląstelių proliferaciją kontroliuoti naudojant antisense terapiją.

Chimeriniai oligonukleotidai geno korekcijoje:

Daugelis genetinių ligų atsiranda dėl vienos bazinės poros mutacijų. Buvo sukurta strategija, kaip ištaisyti tokius defektus, naudojant chimerinius oligonukleotidus, sudarytus iš 68 vienetų RNR-DNR oligonukleotido. Šis chimerinis oligonukleotidas turi plaukų segtukus ir metilintus ribozės cukrus (2 -oje anglies dalyje). Plaukų segtukai apsaugo molekulę nuo eksonukleazių skilimo, o metilinta ribozė apsaugo nuo virškinimo RNazės būdu.

Vienos bazės poros mutacijos korekcija naudojant chimerinį oligonukleotidą pavaizduota 13.12 pav. RNR-DNR molekulės (chimeriniai oligonukleotidai) lengviau jungiasi su dvipuse DNR ir koreguoja mutavusią bazinę porą.

Aptamerai kaip terapiniai agentai:

Ypatingas oligonukleotidų tipas, kuris gali specifiškai prisijungti prie tikslinių baltymų, o ne prie nukleorūgščių, vadinamas aptameriais. Aptamerai yra naudingi kaip terapiniai agentai. Pavyzdžiui, aptameris, kuris gali prisijungti prie trombino, slopina kraujo krešėjimą. Tokie oligonukleotidai gali būti naudojami chirurginėse procedūrose.

Ribozimai kaip terapiniai agentai:

RNR molekulės, kurios gali tarnauti kaip fermentai (biokatalizatoriai), vadinamos ribozimais. Natūraliai atsirandantys ribozimai turi būti modifikuoti taip, kad jie galėtų specifiškai hibridizuotis su mRNR sekomis ir blokuoti baltymų biosintezę (vertimą).

Tačiau yra ribojimas tiesiogiai įterpti ribozimus į tikslines ląsteles, nes jos lengvai skaidomos. Tai galima įveikti, surišus ribozimą su oligodeoksinukleotidu. Yra galimybė gydyti tam tikras vėžio rūšis ir virusines ligas genetiškai modifikuotais ribozimais.


Strategijos, skirtos nustatyti galimas terapines tikslines RNR vietas

Antisense agentai yra galingi įrankiai, slopinantys genų ekspresiją tam tikra seka. Jie naudojami funkcinei genomikai, kaip diagnostikos priemonės ir gydymo tikslais. Pagal veikimo būdą galima atskirti tris antisensinių agentų klases: vienos grandinės antisense oligodeoksinukleotidai, kataliziškai aktyvūs RNR/DNR, tokie kaip ribozimai, DNR arba užrakintos nukleorūgšties (LNR) fermentai ir mažos trukdančios RNR molekulės, žinomos kaip siRNR. Tikslinių vietų parinkimas labai struktūrizuotose RNR molekulėse yra labai svarbus sėkmingam jų taikymui. Tai sunki užduotis, nes RNR surenkama į nukleoproteinų kompleksus ir sudaro stabilias antrines struktūras in vivo, todėl didžioji dalis molekulės yra neprieinama tarpmolekulinių bazių poravimui su papildomomis nukleorūgštimis. Šioje apžvalgoje aptariame kelias atrankos strategijas, skirtas nustatyti galimas tikslines RNR molekulių vietas. Visų pirma, mes sutelkiame dėmesį į kombinatorinius bibliotekos metodus, kurie leidžia atrinkti didelio našumo sekas, kad būtų galima sukurti antisense agentus.


Antisense veikimo mechanizmas

Antisense oligonukleotidai yra skirti prisijungti prie RNR per Watson -Crick hibridizaciją. Paprastai jų dydis svyruoja nuo 12 iki 25 nukleotidų, o dauguma antisensinių oligonukleotidų yra 18–21 nukleotidų ilgio. Kai oligonukleotidas prisijungia prie tikslinės RNR (Crooke, 1999), gali būti naudojami keli mechanizmai, skirti slopinti RNR funkciją. Geriausiai apibūdinamas antisense mechanizmas lemia tikslinės RNR skilimą endogeninėmis ląstelių nukleazėmis, tokiomis kaip RNazė H arba nukleazė, susijusi su RNR trukdžių mechanizmu. Tačiau oligonukleotidai, slopinantys tikslinio geno ekspresiją nekatalitiniais mechanizmais, tokiais kaip splaisingo moduliacija ar transliacijos sustabdymas, taip pat gali būti stiprūs ir selektyvūs genų funkcijos moduliatoriai.

RNazė H yra visur esančių fermentų, skaldančių RNR -DNR heteroduplekso RNR grandinę, šeima, kurios žinduolių ląstelėse yra bent dvi formos (Lima ir kt., 2001). Antisense oligonukleotidai, kurie slopina genų ekspresiją nuo RNazės H priklausomu veikimo mechanizmu (1 pav.), Turi nepertraukiamą mažiausiai nuo penkių iki septynių į DNR panašių nukleotidų segmentą, palaikantį RNazės H aktyvumą (Monia ir kt., 1993 Wu ir kt., 1999). Dauguma šiuo metu klinikiniuose tyrimuose naudojamų antisensinių vaistų naudoja RNazės H mechanizmą (1 lentelė). Taigi oligonukleotidai, veikiantys RNazės H veikimo mechanizmu, yra gerai apibūdinami pagal jų farmakologiją, farmakokinetiką ir toksiškumą.

Nuo RNazės H priklausomas antisense mechanizmas. Vienos grandinės oligonukleotidai per plazmos membraną pernešami blogai būdingais natūraliais procesais arba naudojant pagalbines priemones, tokias kaip katijoniniai lipidai (1 žingsnis). Patekę į citoplazmą, viengrandžiai oligonukleotidai greitai kaupiasi ląstelės branduolyje (2 ir 3 veiksmai), kur jie jungiasi prie tikslinės RNR (4 žingsnis). Prisijungusi prie RNR, RNazė H atpažįsta oligonukleotidą/RNR dupleksą kaip substratą, skaldo RNR grandinę ir atpalaiduoja antisense oligonukleotidą (5 žingsnis). Nors įrodyta, kad RNazė H skaldo RNR branduolyje, RNazė H taip pat yra citozolyje, todėl skilimas gali įvykti ir tame ląstelių skyriuje

Kitas nuo RNazės priklausomas antisense mechanizmas, kuriam pastaruoju metu buvo skirta daug dėmesio, yra trukdanti RNR arba RNR (Fire ir kt., 1998 Zamore, 2002). Ilgos dvigubos RNR (dsRNR) įvedimas į eukariotines ląsteles lemia specifinę sekos homologinių genų transkriptų (RNR) skilimą. Didesnės RNR molekulės endogeninės nukleazės būdu metabolizuojamos į trumpesnius 20–21 nukleotidų, dviejų grandinių RNR fragmentus (siRNR). SiRNR molekulės savo ruožtu jungiasi prie baltymų komplekso, vadinamo RNR sukeltu slopinimo kompleksu (RISC), kuris išvynioja dvi RNR molekulių grandines ir leidžia antisensinei grandinei prisijungti prie tikslinės RNR molekulės (Zamore ir kt., 2000 Zamore , 2002). RISC taip pat turi endonukleazės aktyvumą, kuris hidrolizuoja tikslinę RNR toje vietoje, kur yra susieta antisense grandinė. Neseniai buvo įrodyta, kad 21 nukleotido siRNR dupleksai gali būti tiesiogiai transfekuojami į žinduolių ląsteles, todėl selektyviai suyra tikslinė RNR (2 pav.) (Caplen ir kt., 2001 Elbashir ir kt., 2001). RNR trukdžiai yra antisense veikimo mechanizmas, nes galiausiai vienos grandinės RNR molekulė prisijungia prie tikslinės RNR molekulės pagal Watson-Crick bazės susiejimo taisykles ir įdarbina ribonukleazę, kuri suskaido tikslinę RNR. RNRi, ypač siRNR, buvo plačiai pripažinta kaip genų funkcionalizavimo metodika kultivuotose žinduolių ląstelėse.

nuo siRNR priklausomas antisense mechanizmas. Dvigrandiai RNR oligonukleotidai pernešami per plazmos membraną, naudojant blogai apibūdintus natūralius procesus arba naudojant pagalbininkus, tokius kaip katijoniniai lipidai (1 žingsnis). Patekęs į citoplazmą, dvigubos grandinės RNR oligonukleotidas atpažįstamas ir surišamas prastai apibrėžtu baltymų kompleksu, vadinamu RISC (2 žingsnis). Helikazės aktyvumas išvynioja abi RNR grandines (3 žingsnis) ir palengvina antisensės grandinės prisijungimą prie tikslinės RNR (4 žingsnis). Prisirišęs prie tikslinės RNR, ribonukleazė suskaido tikslinę RNR (5 žingsnis). Nežinoma, ar ribonukleazė taip pat hidrolizuoja antisense grandinę

Ląstelėse yra ir kitų RNazių, kurios gali būti naudojamos panašiai kaip RNazė H arba dsRNazė, susijusi su RNR. Pavyzdžiui, Wu ir kt. (1998) pranešė, kad vienos grandinės, fosforotioato modifikuoti oligoribonukleotidai gali skatinti selektyvų Ha-ras mRNR praradimą žmogaus ląstelėse. Fermento aktyvumas atitinka RNazės III tipo fermentą ir gali būti panašus, jei ne identiškas, į RNazę III, susijusią su RISC (Wu ir kt., 1998 Martinez ir kt., 2002). RNazė L yra dar vienas RNazės fermentas, kuris buvo naudojamas antisense (Torrence ir kt., 1993). RNazė L yra ribonukleazė, kurią aktyvuoja 2′-5′-susieti oligoadenilatai, susidarę reaguojant į interferono aktyvavimą. Pranešta, kad 2′-5 ′ oligoadenilato ryšys su antisense oligonukleotidu skatina selektyvų tikslinės mRNR skilimą (Torrence ir kt., 1993 Leaman ir kt., 2002).

Be ląstelių nukleazių panaudojimo tikslinei RNR skaldyti, oligonukleotidai gali būti suprojektuoti taip, kad po hibridizacijos chemiškai suskaidytų tikslinę RNR. Geriausiai apibūdinami tokių oligonukleotidų pavyzdžiai yra ribozimai ir DNR fermentai (Breaker ir Joyce, 1994 Cech ir Uhlenbeck, 1994). Šiuo metu ribozimas, nukreiptas į VEGF, yra I/II fazės klinikiniuose tyrimuose (Weng ir Usman, 2001).

Taip pat buvo aprašyti antisense mechanizmai, kurie tiesiogiai neskatina RNR skilimo. RNR (antisense oligonukleotido receptoriaus) užėmimas oligonukleotide gali steriškai blokuoti RNR transliaciją, ty transliacijos sustabdymą. Mes nustatėme, kad tik tam tikros vietos 5'-neišverstame mRNR regione yra veiksmingos antisensinio oligonukleotido tikslinės vietos, kurios veikia šiuo mechanizmu. Visų pirma, transkripto 5'-galas atrodo tinkama oligonukleotidų tikslinė vieta kai kuriems molekuliniams taikiniams, nes šis regiono užimtumas neleidžia ribosomai surinkti ant RNR (Baker ir kt., 1997).

Daugumos žinduolių RNR ląstelės branduolyje atliekami keli apdorojimo etapai po ar transkripcijos, įskaitant 5'-dangtelio struktūros pridėjimą, sujungimą ir poliadenilinimą. RNR apdorojimo reguliavimas yra dar vienas veiksmingas mechanizmas, kuriame oligonukleotidai gali būti naudojami genų ekspresijai reguliuoti. Paskelbti tyrimai, dokumentuojantys, kad antisense oligonukleotidai gali būti naudojami RNR susiliejimui reguliuoti tiek ląstelių tyrimuose, tiek graužikų audiniuose (Dominski ir Kole, 1993 Taylor ir kt., 1999b Sazani ir kt., 2001 Mercatante ir kt., 2002 Sazani ir kt., 2002). Vis daugiau alternatyviai sujungtų transkriptų yra atpažįstami koduojant funkciškai antagonistinius baltymus, todėl tai yra perspektyvus būdas grįžtamai „perjungti“ baltymų funkciją. Vienas gerai dokumentuotas pavyzdys yra apoptozę reguliuojantis genas Bcl-x. Žinoma, kad dažniausiai išreikštas sujungimo variantas (Bcl-xL) yra antiapoptotinis, tačiau geno variantas, neturintis II egzono dalies, yra proapoptotinis (Bcl-xS).Kurdami oligonukleotidus į regionus, supančius atitinkamą susiliejimo vietą, mums pavyko perjungti pagamintą sujungimo variantą iš Bcl-xL į Bcl-xS ir dėl to jautrinome ląsteles chemoterapiniams agentams (Taylor ir kt., 1999b Mercatante ir kt.) al., 2002). Oligonukleotidų prisijungimas prie pre-mRNR taip pat gali būti panaudotas, norint užmaskuoti poliadenilinimo signalus ant pre-mRNR, verčiant ląstelę naudoti alternatyvias poli A vietas (Vickers ir kt., 2001).

Mes tiesiogiai palyginome daugelį aukščiau aprašytų antisense mechanizmų ląstelėse atliekamuose tyrimuose ir nustatėme, kad optimizuoti oligonukleotidai, veikiantys pagal kiekvieną mechanizmą, gali būti stiprūs ir selektyvūs genų ekspresijos inhibitoriai. Pavyzdžiui, lyginant nuo RNazės H priklausomus oligonukleotidus su siRNR oligonukleotidais, mes nustatėme, kad jie pasižymi panašiu stiprumu, veikimo trukme, tiksliniu selektyvumu ir efektyvumu (Vickers ir kt., 2003). Mes taip pat nustatėme, kad oligonukleotidai, moduliuojantys RNR susiliejimą steriniais mechanizmais, ir oligonukleotidai, kurie neleidžia transliacijai, gali būti tokie pat stiprūs ir veiksmingi genų ekspresijos inhibitoriai kaip oligonukleotidai, veikiantys kataliziniais mechanizmais (Baker ir kt., 1997). Šie rezultatai rodo, kad tikslinės RNR katalizinė apyvarta nėra antisense oligonukleotidų greičio ribojimo žingsnis. Mūsų rezultatai rodo, kad atliekant eksperimentus su ląstelėmis, nė vienas mechanizmas nėra žymiai pranašesnis už kitus mechanizmus, todėl mechanizmas turėtų būti pritaikytas konkrečiam biologiniam pritaikymui. Dėl in vivo programose, nuo RNazės H priklausomas mechanizmas buvo plačiai išnaudotas siekiant slopinti šimtus, jei ne tūkstančius genų graužikų, nežmoginių primatų ir žmogaus audiniuose. Kadangi yra daug mažiau informacijos apie kitų antisense mechanizmų veiksmingumą in vivo, dar per anksti daryti išvadas dėl jų ilgalaikio potencialo in vivo studijas.


Anotacija

Dėl didelio mažo tankio lipoproteinų (MTL) receptorių ekspresijos lygio naviko ląstelėse LDL yra patrauklus nešiklis, leidžiantis selektyviai pristatyti vaistus į šias ląsteles. Šio tyrimo tikslas-leisti onkogenui nukreiptus antisense oligodeoksinukleotidus (ODN) įtraukti į MTL lipidų dalį. Todėl ODN buvo konjuguoti su oleino rūgštimi, cholesteroliu ir keliais kitais steroidiniais lipidais. Pastarieji steroidiniai lipidai buvo sintezuojami pradedant tulžies rūgštimis ir buvo keičiami lipofiliškumu, prijungiant oleino rūgšties esterio struktūras. Lipidinės struktūros, aktyvuotos kaip pentafluorfenilo esteriai, tirpalo fazėje buvo konjuguotos su 3'-amino uodegos ODN. ODN, sujungtus su litocholio rūgštimi, oleino rūgštimi ir cholesteroliu, būtų galima lengvai išgryninti atvirkštinės fazės (RP) -HPLC. Tačiau ODN, konjuguoti su oleoilo steroidų esterio struktūromis, negrįžtamai susiejami su kolonėlės medžiaga. Šie labai lipidiniai ODN buvo atskirti nuo nekonjuguoto ODN elektroforezės būdu 1% mažai tirpstančiame agarozės gelyje, kuriame yra 0,1% Tween 20. Šis metodas buvo labai veiksmingas išskiriant ODN, sujungtus su oleoilo steroidų esterio struktūromis. ODN, konjuguoti su cholesteroliu ir ličio ir choleno rūgšties oleoilo esteriais, lengvai ir beveik visiškai susiję su MTL. Tačiau mažiau lipidiniai ODN ir ODN, konjuguoti su Chenodeoxycholic rūgšties dioleoilo esteriu, atitinkamai nesusiję ir buvo nevisiškai susiję. Litocholio rūgštis ir oleino rūgštis tikriausiai nėra pakankamai lipofilinės, kad sukeltų ryšį su MTL, tuo tarpu dioleoilo esterio struktūra tikriausiai yra per didelė ir išplėsta, kad būtų galima suskaidyti į MTL lipidų dalį. Darome išvadą, kad keli lipidų-ODN gali lengvai susieti su MTL, o tai leidžia į onkogeną nukreiptus antisense ODN perduoti MTL receptorių keliu.

Autorius, kuriam turi būti skirta korespondencija. Paštas: [email  protected] Telefonas: 31-71-5276038. Faksas: 31-71-5276032.


Sigmos receptoriai: biologija ir terapinis potencialas

Praėjus daugiau nei 20 metų po to, kai sigmos receptoriai buvo identifikuoti kaip unikali surišimo vieta smegenyse ir periferiniuose organuose, vis dar lieka keletas klausimų, susijusių su šiuo receptoriumi. Iki šiol buvo klonuotas tik vienas iš receptorių potipių, tačiau endogeninis ligandas vis dar nežinomas, o galimas receptoriaus susiejimas su įprasta antrosios pasiuntinio sistema yra prieštaringas. Nuo pat pradžių sigmos receptoriai buvo siejami su įvairiais centrinės nervų sistemos sutrikimais, tokiais kaip šizofrenija ar judesių sutrikimai. Šiandien, po šimtų straipsnių, kuriuose nagrinėjama sigmos receptorių svarba smegenų funkcijai, plačiai pripažįstama, kad sigmos receptoriai yra naujas ir skirtingas būdas galimai farmakologiškai gydyti keletą su smegenimis susijusių sutrikimų. Šioje apžvalgoje pirmiausia apibendrinama tai, kas žinoma apie sigmos receptoriaus biologiją dėl jo tariamos struktūros ir pasiskirstymo centrinėje nervų sistemoje. Taip pat aptariamas sigmos receptorių, reguliuojančių ląstelių funkcijas ir kitas neuromediatorių sistemas, vaidmuo, taip pat trumpa galimų endogeninių ligandų apžvalga. Galiausiai, nors nė vienas specifinis sigmos ligandas nepasiekė rinkos, aptariami skirtingi farmakologiniai metodai, padedantys palengvinti ir gydyti kelis centrinės nervų sistemos sutrikimus ir trūkumus, įskaitant šizofreniją, skausmą, atminties trūkumą ir kt., Apžvelgiant įvairius junginius ir jų galimą terapinį panaudojimą.

Tai prenumeratos turinio peržiūra, prieiga per jūsų instituciją.


Sense, Antisense ir sveikas protas

Pagrindinė molekulinės biologijos dogma numato, kad DNR molekulės yra genetinis sandėlis, kuriame yra visas repertuaras organizmo ląstelėms ir audiniams kurti. Aukštesniuose eukariotuose didelė dalis visos genominės medžiagos, galbūt gerokai daugiau nei 90%, nekoduoja jokio pirmtako. Baltymus koduojančios DNR sritys, dar vadinamos genais, yra tarp šios nefunkcinės genomo dalies. Baltymai, ląstelės darbinės molekulės, atliekančios struktūrines, reguliavimo ir kitas genų koduotų veiklos programas, yra sintezuojamos per sudėtingą, molekulinį dviejų žingsnių procesą. DNR saugoma genetinė informacija pirmiausia nukopijuojama į pasiuntinio RNR (mRNR) molekules proceso, vadinamo transkripcija. mRNR molekulės tada ribosominės mašinos paverčiamos baltymais per nepaprastai tikslų, laipsnišką peptidų ir baltymų surinkimą. Šio proceso metu mRNR nukleorūgščių seka išverčiama į aminorūgščių molekulių kalbą.

DNR sudaro 2 antiparallelinės ir viena kitą papildančios pagrindo poros polinukleotidų grandinės, kurios vingiuoja per erdvę ir sudaro dvigubą spiralę. Transkripcijos procese 1 iš DNR grandinių (šablono grandinė) nukopijuojama į papildomą molekulę (mRNR), kurios bazinė seka yra išdėstyta tripletu (3 nukleotidų grupė) arba kodonu. Tada kiekvienas kodonas skaitomas ir išverčiamas į tam tikrą aminorūgštį, kuri yra įtraukta į pailgėjantį polipeptidą. Kadangi bazių seka išilgai mRNR nustato aminorūgščių seriją, kuri sujungs baltymą, sakoma, kad mRNR seka turi prasmę. Norint pagaminti molekulę, kuri atpažįsta ir jungiasi prie jutimo grandinės, turi būti sukurta eilė nukleotidų, kurie papildo juslių seką. Vadinasi, pavadinimas antisense yra suteikta trumpai DNR arba RNR molekulės grandinei, kuri papildo specifinę mRNR seką.

Idėja naudoti antisense oligodeoksinukleotidus (ODN) buvo pasiūlyta 1967 m., Siekiant specifiškai slopinti genų ekspresiją, formuojant mRNR -DNR dupleksą, slopinančią ar neleidžiančią nukreipti tikslinį pranešimą į baltymą (1). Tuo metu nebuvo jokio automatizuoto metodo, skirto gaminti daugiau nei 4 bazių ir pakankamo kiekio oligomerus. Per pastaruosius 20 metų nukleotidų chemijos pažanga, sintezių automatizavimas ir nukleazėms atsparios DNR stuburo sukūrimas padarė DNR (ir RNR) antisense molekules lengvai prieinamas. Antisense molekulės buvo naudojamos genų reguliavimui, numušimui ar ekspresijai kultūroje (2), siekiant sukurti augalus (3) ir sukurti chemoterapinius agentus nuo virusų (4,5).

Nustačius genus, atsakingus už ląstelių augimą, vystymąsi ir piktybinę transformaciją (onkogenai ir naviko slopinimo genai), atsirado noras šią informaciją paversti naujomis vėžio, širdies ir kraujagyslių ligų bei kitų įprastų negalavimų gydymo strategijomis. Piktybinių ligų onkogeno ekspresijos „nutildymo“ koncepcija dabar išbandoma daugybėje klinikinių tyrimų. Antisense oligonukleotidai, nukreipti į Ha-ras, c-raf, bcl-2, c-myb, bcr-abl, ir erb-B2 onkogenai tiriami sergant įvairiais vėžio tipais (6). Intymių lygiųjų raumenų hiperplazijos moduliacija po vainikinių arterijų angioplastikos ir širdies alograftų taip pat bandoma in vivo su ODN (7,8). Pacientams, sergantiems Krono liga, remisija buvo sėkminga naudojant fosforotioato ODN, kuris slopina žmogaus endotelio adhezijos molekulę ICAM-1 (9). Svarbiausias galimas antisense panaudojimas virusinėms ligoms yra ŽIV infekcija. Neseniai atliktas I fazės tyrimas su ŽIV infekuotais pacientais, naudojant ODN, nukreiptą į ŽIV geno gag vietą, parodė minimalų šalutinį poveikį (10). Antisense ODN taip pat yra nukreipti prieš citomegalovirusinį retinitą - labai neįgalią ligą, pastebėtą AIDS sergantiems pacientams (11).

Keletas tyrėjų taip pat pasiūlė antisense DNR molekules kaip įrankį atvaizduoti navikus, išreiškiančius įvairius onkogenus (12, 13). Antisensės molekulių naudojimo vėžio terapijoje reikalavimai yra gerai apibrėžti (14) ir buvo naudojami kaip kriterijai jų panaudojimui vaizduojant (15). Priešingai nei terapijoje, kai viena antisense molekulė ilgainiui gali slopinti onkogeno ekspresiją, vaizdavimo metodai reikalauja didelės antisense molekulių koncentracijos tikslinėse ląstelėse. Sėkmingam antisense vaizdavimui tikslinės ląstelės turėtų turėti pakankamą kiekį mRNR onkogeno produkto ir specialiai bei selektyviai laikyti DNR antisense zondus. Buvo paskelbti įvairūs antisense molekulių žymėjimo pavieniais fotonais ir pozitronų skleidėjais metodai (16,17).

Šiuolaikiniame tyrime, apie kurį pranešta šiame numeryje Branduolinės medicinos žurnalas, Zhang ir kt. (18) ištyrė merkaptoacetiltriglicino/jungiamosios grupės poveikį 18 -mečio fosforotioato DNR antisense hibridizacijai su cikliškos adenozino monofosfato priklausomos I tipo baltymų kinazės A ląstelės augimą reguliuojančios molekulės Iα (RIα) subvienetu. Jie taip pat bandė parodo antisense poveikį įvairioms ląstelių linijoms, išreiškiančioms skirtingus RIα lygius.

Keli veiksniai vaidina lemiamą vaidmenį projektuojant antisense molekules vaizdavimui. Pirmasis veiksnys yra antisense DNR molekulės specifiškumas jos mRNR taikiniui. Darant prielaidą, kad eukariotinėje ląstelėje yra apie 10 4 skirtingų 2 kb vidutinio ilgio mRNR rūšių, bendras RNR sekos sudėtingumas yra apie 2 × 107 bazių. Numatomas tam tikros N bazių sekos įvykių skaičius RNR telkinyje pateikiamas dalijant baseino sudėtingumą iš 4 N. Todėl trumpiausia seka, kuri gali būti unikali tarp 2 × 107 7 RNR telkinio, yra 13 bazių (19).

Antrasis parametras yra duplekso susidarymo tarp antisense molekulės ir jos mRNR taikinio optimizavimas, keičiant DNR zondo seką. Norėdami slopinti genų ekspresiją, daugelis tyrėjų nusprendė nukreipti mRNR transliacijos inicijavimo vietą, darant prielaidą, kad šis regionas yra svarbus ir prieinamas. Nors veiksmingas transliacijos slopinimas paprastai vyksta su DNR oligonukleotidų sekomis, papildančiomis šį regioną, dauguma mRNR molekulės regionų iš tikrųjų yra prieinami ODN, išskyrus tuos, kurie turi daug antiparalelinių dupleksinių struktūrų, vadinamų plaukų segtukais. Žingsniai, kuriais įrodyta, kad antisensės molekulės slopina mRNR, taip pat apima 5′ ribojimą, sujungimą ir mRNR stabilumą. Bendras bazės suporavimo mastas atsispindi kiekvienos RNR molekulės biofizikinėse savybėse ir galiausiai gali būti numatytas pagal taisykles, reglamentuojančias bazinių porų sąveiką. Dabar yra prieinami termodinaminiai algoritmai, skirti numatyti tam tikros RNR antrinę struktūrą, ir jie gali būti naudojami tam tikru mastu, norint parinkti optimalias vaizduojamos mRNR tikslines vietas (20).

Trečia, norint naudoti kaip in vivo vaizdavimo agentą, ODN seka turėtų sugebėti atpažinti ir glaudžiai prisijungti prie jos papildomos sekos tikslinėje nukleorūgštyje 37 ° C temperatūroje. Viena vertus, tai reiškia, kad hibrido disociacijai reikalinga temperatūra (ty hibrido lydymosi temperatūra [Tm]) turėtų būti gerokai didesnė nei 37 ° C, ir, kita vertus, kad esant 37 ° C disociacijos konstanta Komplekso turėtų būti mažai. Kadangi hibrido Tm labai priklauso nuo bazių, susijusių su ryšių poravimu, pobūdžio, būtina, kad tikslinė vieta ir atitinkamai ODN seka būtų parinkta atsižvelgiant į Tm (21).

ODN, kuriuose yra fosfodiesterių jungčių, greitai suskaido serume dėl ekso- ir endonukleazės fermentų, jų pusinės eliminacijos laikas yra maždaug 20 min. Per pastarąjį dešimtmetį didžiausia sėkmė kuriant nukleazėms atsparius ODN buvo pasiekta pakeitus fosforo grupės (fosforotioato ODN) deguonies atomą, kuris nedalyvauja cukraus ir cukraus tilte, sieros atomą. Šis pakeitimas padidina nukleazių stabilumą, išlaiko tirpumą vandenyje ir pagerina ląstelių įsisavinimą (22, 23). Kuriamos įvairios strategijos, skirtos gaminti ODN analogus, turinčius geresnį biologinį prieinamumą ir geresnes medžiagų apykaitos, terapines ir vaizdines savybes, modifikuojant tarpnukleotidinių jungčių, bazių ir cukrų struktūrą (24,25).

Zhang ir kt. (18) turi būti pagirtas už tai, kad naudoja pažangiausias molekulinės biologijos technologijas, tokias kaip spektrofotometrija, paviršiaus plazmono rezonansas, atvirkštinės transkriptazės polimerazės reakcija ir mikroautoradiografija, kad būtų galima palyginti pažymėtos ir nepažymėtos jutimo, antisense ir hibridizacijos, lydymosi temperatūros ir ląstelių kaupimosi koduojamos ODN sekos. Tai, kad žymių pakitimų, palyginti su nepažymėta ODN seka, hibridizacijoje nėra, specifinis antisense sruogų sulaikymas ir tikslinio mRNR kiekio sumažėjimas rodo, kad radioaktyviai pažymėtos antisense molekulės gali būti sėkmingai naudojamos vaizdavimui ir galiausiai terapijai. Antisense ODN trukdo genų ekspresijai keliais mechanizmais. Ląstelės viduje susidarę RNR-DNR dimeriai iš karto pritraukia endogeninę nukleazę RNazę-H, kuri katalizuoja duplekso RNR rūšių skilimą, paliekant nepažeistą DNR seką ir galinčią sąveikauti su ta pačia seka kitose mRNR molekulėse. Šis mechanizmas greičiausiai sumažina ląstelių augimą ir proliferaciją, pastebėtą in vitro ir ikiklinikiniuose bei klinikiniuose tyrimuose. Šio tyrimo pastebėjimas, kad padidėja tikslinės mRNR sintezė, rodo neigiamą grįžtamojo ryšio mechanizmą tarp mRNR kiekio ląstelėje ir mRNR sintezės. Tai nauja koncepcija, kuri yra įdomi ir intriguojanti.

Plikos nukleorūgštys turi stiprų neigiamą krūvį, kuris gali neleisti joms prasiskverbti pro ląstelės membranos bilipidinį sluoksnį. Tačiau atrodo, kad ODN įsisavinimas ląstelėse yra natūralus reiškinys, ir tikriausiai yra susijęs su receptoriumi. Cheminiai pakeitimai, kad ODN būtų labiau elektriškai neutralūs, siejami su nešikliais, tokiais kaip lipidų pūslelės, liposomos ir adenoviruso vektorius, ir antisense nanodalelių paruošimas (26–29), atrodo, žymiai pagerina ODN įsisavinimą ląstelėse.

Kaip ir specifinį genų reporterių pristatymą į tikslines ląsteles, antisense pristatymą į tikslines ląsteles reikės patikslinti išsamiau (30). Šis veiksnys taip pat gali trukdyti hibridizacijai ir jį reikės toliau tirti. Zhang ir kt. (18) gali būti šių naujų ODN zondų patvirtinimo šablonas.

Branduolinėje medicinoje kuriamas naujas būdas išnaudoti išskirtinę Watson-Crick nukleorūgščių bazių porų specifiką. Antisense DNR technologija, nors ir dar tik pradedama gydyti, dabar yra aktyviai konceptuojama ir tiriama vaizduojant. Manau, kad šis novatoriškas požiūris greitai subręs ir bus sukurta nauja unikalių radiofarmacinių agentų klasė, galinti apibūdinti ląstelių ir organų fenotipą ir genotipą.


Antisense terapinių intervencijų, skirtų molekuliniams biologiniams tikslams įvairiose ligose, apžvalga

Antisense technologijų principas grindžiamas specifiniu nepageidaujamo poveikio slopinimu genų ekspresija blokuojant mRNR aktyvumą. Jau seniai atrodė, kad tai ideali strategija panaudoti naujas genomo žinias narkotikų atradimui ir kūrimui. Per pastaruosius 20 metų technologija, susijusi su antisense kūrimu, smarkiai patobulėjo, o naujos chemijos dėka antisense oligonukleotidai tapo galingais ir universaliais įrankiais, tiriančiais baltymų funkciją gyvose ląstelėse. Pastaraisiais metais antisense technologijos buvo plačiai naudojamos kaip stiprios ir perspektyvios priemonės šiam tikslui. Klinikinių tyrimų metu sparčiai didėja antisense molekulių skaičius. Antisense technologijos suteikia paprastą ir veiksmingą metodą narkotikų atradimui ir kūrimui, ir tikimasi, kad tai taps realybe artimiausiu metu.

Jasbir Singh, Harmeet Kaur, Aditi Kaushik ir Sapna Peer, 2011. Antisense terapinių intervencijų, skirtų molekuliniams biologiniams tikslams įvairiose ligose, apžvalga. International Journal of Pharmacology, 7: 294-315.

Antisense agentai yra vaistai, trukdantys komunikacijos procesui, liepiantiems ląstelėms gaminti nepageidaujamą baltymą. Baltymai vaidina pagrindinį vaidmenį beveik visuose žmogaus metabolizmo aspektuose. Beveik visos žmonių ligos yra netinkamos baltymų gamybos ar sutrikusios baltymų veiklos rezultatas (Chan ir kt., 2006). Tradiciniai vaistai yra skirti sąveikauti su viso kūno baltymų molekulėmis, kurios palaiko ar sukelia ligas, tačiau vaistai nuo antisensų yra skirti slopinti ligas sukeliančių baltymų gamybą, prisijungiant prie baltymo plano ir konkrečiai užkertant kelią jo pavertimui patogeniniu veiksniu, pvz. kuris sukelia nekontroliuojamą naviko augimą (Aboul-Fadl, 2006). Jie gali būti skirti gydyti įvairias ligas, įskaitant infekcines, uždegimines, vėžines, širdies ir kraujagyslių ligos ir gali būti selektyvesni, todėl veiksmingesni ir mažiau toksiški nei tradiciniai vaistai. Skirtingai nuo genų terapijos, antisense vaistai nekeičia žmogaus genų ir neturi jokio poveikio žmogaus genetinei informacijai. Terapinis antisense metodų taikymas šiuo metu tiriamas daugelyje skirtingų sričių (Galderisi ir kt., 1999). Pirmasis antisensinis vaistas Fomiversen, skirtas AIDS sergantiems pacientams gydyti citomegalovirusinį retinitą, buvo patvirtintas 1998 m. (Calvez ir kt., 2004 Van Aerschot, 2006). Antisense agentų naudojimas kaip terapinės priemonės sukėlė didelį entuziazmą mokslinių tyrimų ir medicinos bendruomenėje. Per pastaruosius kelerius metus sparčiai daugėjo antisense molekulių, progresuojančių I, II ir III fazės klinikiniuose tyrimuose (Aboul-Fadl, 2005). „ISIS Pharmaceuticals“ pirmauja atlikdama 11 I fazės, 7 II fazės ir 3 III fazės bandymus. „Genta“ veikia kartu su „Genasense“, priešvėžinių ląstelių gydymui skirta Bcl 2 antisensė yra III fazėje. „AVI Biopharm“ turi trečiosios kartos antisense oligonukleotidų platformą ir aplink ją bando 4 I, 5 II ir 2 III fazės tyrimus. „Hybridon“ atliko 2 I fazės etapus ir suplanavo du 2 fazės tyrimus (Phillips, 2004). Šioje apžvalgoje aprašoma pagrindinė antisense technologijos koncepcija, jos kūrimas ir naujausios galimos terapinės programos.

ANTISENSE agentų molekulinis mechanizmas

Dažniausiai antisense agentai yra sintetinės vienos grandinės trumpos DNR bazių sekos, skirtos hibridizuotis su specifinėmis mRNR sekomis, sudarančiomis dupleksą. Ši DNR-RNR jungtis pritraukia endogeninę nukleazę, RNazę H, kuri sunaikina surištą RNR ir išlaisvina DNR antisenzę, kad ji vėl hibridizuotųsi su kita mRNR kopija (Crooke, 1998). Tokiu būdu poveikis yra ne tik labai specifinis, bet ir ilgesnis dėl antisense DNR sekos perdirbimo. Bendras baltymų molekulės sintezės slopinimo mechanizmas pateiktas 1 pav.

Sumažinus mRNR, sumažėja bendras baltymų kiekis, nurodytas mRNR. Taip pat teoruojama, kad hibridizacija steriškai neleidžia ribosomoms išversti mRNR žinios į baltymą. Todėl yra bent du būdai, kaip antisensai gali veiksmingai sumažinti kuriamą baltymų kiekį: RNazė H pagrįstas RNR skilimas (pvz., Fosfodiesteris, fosforotioatas) ir trukdymas ribosomų surinkimui ir transliacijai (pvz., Peptidas) nukleorūgštys , morfolino oligonukleotidai) (Bennett ir Swayze, 2009 Dryselius ir kt., 2003 Maguire, 2009).

Yra keletas pagrindinių antisense agentų klasių: antisense sekos, paprastai vadinamos Antisense oligonukleotidų (ASON) ribozimais ir RNR interferencija (RNR).

Antisense oligonukleotidai: Antisense oligonukleotidus kaip terapines medžiagas pasiūlė Zamecnik ir Stephenson, 1978 m. Nepaisant to, prireikė beveik ketvirčio amžiaus, kad šis potencialas būtų realizuotas. Minimalus antisense oligonukleotidų ilgis, norint gauti specifinį surišimą, yra 11 bazių, tačiau dauguma tiriamų yra 15–25 bazių diapazone. Sintetiniai oligonukleotidai yra svetimi ląstelėms, į kurias jie įvedami, ir iš karto tampa endogeninių nukleazių grobiu. Jei sintetiniai oligonukleotidai ląstelėje pasiektų tokį patvarumo lygį, kokio reikia jų užduotims atlikti, jie turėtų būti apsaugoti nuo tų endogeninių nukleazių. Kad būtų įvykdyti visi šie reikalavimai, normalius oligonukleotidus (2a pav.) Reikia chemiškai modifikuoti tinkamu būdu. Yra trys galimos nukleotido vietos, kuriose galima įvesti apsaugines modifikacijas (Kurreck, 2003). Tiek DNR, tiek RNR nukleotidų bazė gali būti pakeista arba gali būti pakeisti fosfato pagrindai. RNR nukleotiduose taip pat gali būti modifikuota 2 'hidroksilo grupė, kurios trūksta DNR nukleotiduose. Apsauga nuo nukleotidų modifikavimo yra susijusi su pakeitimu, kuris apsaugo nuo nukleazės skilimo ir kuris tuo pačiu metu nepašalina norimo oligonukleotidų sekos poveikio, blokuodamas papildomą hibridizaciją arba kenkdamas ląstelei. Pagal jų kartas jie buvo suskirstyti į tris tipus.

Pirmosios kartos antisense-oligonukleotidai: Pirmosios kartos antisense agentai turi stuburo modifikacijas, tokias kaip fosfato jungties deguonies atomo pakeitimas siera (fosforotioatais) (2b pav.), Metilo grupe (metilfosfonatai) (2c pav.) Arba aminais (fosforamidatai) ) (2d pav.). Iš jų fosforotioatai buvo sėkmingiausi ir naudojami genų nutildymui dėl jų pakankamo atsparumo nukleazėms ir gebėjimo sukelti RNazės H funkcijas (Campbell ir kt., 1990 Zon, 1995). Fosforohioato oligonukleotidus pirmą kartą susintetino septintajame dešimtmetyje Ecksteinas ir jo kolegos ir jie pirmą kartą buvo naudojami kaip antisensiniai oligonukleotidai (ASON), siekiant slopinti Matsukura ir bendradarbių ŽIV replikaciją (Matsukura ir kt., 1987). Tačiau jų surišimo afiniteto tikslinėms sekoms, specifiškumo ir įsisavinimo ląstelėse profiliai yra mažiau patenkinami (Chen ir kt., 2005).

Antros kartos antisense-oligonukleotidai: Problemos, susijusios su fosforotioato oligodeoksinukleotidais, tam tikru mastu išsprendžiamos antrosios kartos oligonukleotiduose, kuriuose yra nukleotidų su alkilo modifikacijomis ribozės 2 ’padėtyje. 2'-O-metilas ir 2'-O-metoksietilo RNR yra svarbiausi šios klasės atstovai. 2'-O-metilą ir 2'-O-metoksietilo darinius galima toliau derinti su fosforotioato jungtimi (3 pav.) (Manoharan, 1999). Antisensiniai oligonukleotidai, pagaminti iš šių statybinių blokų, yra mažiau toksiški nei fosforotioato ASON ir šiek tiek padidina afinitetą jų papildomoms RNR. Klausimai, susiję su jo veiksmingumu skatinant tikslinės RNR RNazės H skilimą, kelia susirūpinimą dėl šio antrosios kartos oligonukleotidų. Kadangi RNazės H skilimas yra geidžiamiausias antisense efekto mechanizmas ir kadangi norint nukleazės atsparumo pageidautinos 2-O-alkilo modifikacijos, hibridinė oligonukleotido konstrukcija, turinti abi charakteristikas, pasirodė antisensinio oligonukleotido pavidalu. Tarpinėje yra centrinis deoksinukleotidų blokas, kurio pakanka Rnase H skilimui sukelti, kartu su 2'-O-metilo modifikuotų ribonukleotidų blokais, kurie apsaugo vidinį bloką nuo nukleazės skilimo (Monia ir kt., 1993).

Trečios kartos antisense-oligonukleotidai: Buvo sukurti įvairūs nukleorūgščių analogai, kurie pasižymi padidėjusiu šiluminiu stabilumu, kai jie hibridizuojami su papildomomis DNR arba RNR, palyginti su nemodifikuota DNR: DNR ir DNR: RNR duplekais. Tai yra trečios kartos antisense oligonukleotidų modifikacijos. Trečiosios kartos sudėtyje yra struktūrinių elementų, tokių kaip zviterioniniai oligonukleotidai (molekulėje turintys ir teigiamų, ir neigiamų krūvių) Peptidinės nukleorūgštys (PNA) (su pseudopeptido stuburu) (4a pav.), Užrakintos nukleorūgštys (LNR) (BNA) (4b pav.), Heksitolio nukleorūgštys (HNA) (4c pav.) Ir Morfolino oligonukleotidai (4d pav.) (Hyrup ir Nielson, 1996 Elayadi ir Corey, 2001 Declercq ir kt., 2002). PNA yra dramatiški pokyčiai, kai cukraus fosfato pagrindas visiškai pakeičiamas poliamido jungtimis. Nors šios konstrukcijos suteikia didesnį stabilumą ir palankią hibridizacijos kinetiką, jos kenčia dėl to, kad nėra prieinamos RNazės H skilimo mechanizmui, probleminio tirpumo ir pristatymo sunkumų (Pensato ir kt., 2007). Naujausia ir perspektyviausia trečiosios kartos modifikacija yra užrakintos nukleorūgštys (LNR). LNR nukleotidai yra nukleorūgščių analogų klasė, kurioje ribozės žiedas yra „užrakintas“ ir#148 metileno tiltu, jungiančiu 2'-O atomą ir 4'-C atomą. Iš karto buvo pastebėta, kad LNR pasižymi nepaprastai padidėjusiu termodinaminiu stabilumu ir sustiprintu nukleorūgščių atpažinimu. Įrodyta, kad LNR yra galinga priemonė daugelyje molekulinių biologinių taikymų, kai standartiniai DNR oligonukleotidai arba RNR riboprobai neparodo pakankamo afiniteto ar specifiškumo (Veedu ir Wengel, 2009 Stein ir kt., 2010).

Heksitolio nukleorūgštyse (HNA) ASON furanozės cukraus dalis pakeičiama šešių narių heksitolio komponentu (De Bouvere ir kt., 1997). Konformatyviai lanksčią dezoksiribozę pakeitus ribotu anhidroheksitolio žiedu, susidaro struktūrinis HNR organizmas, kad susidarytų A tipo sraigtai. Jie parodė reikšmingą padidėjusį surišimo afinitetą papildomai RNR (maždaug 3 ° C pagal modifikaciją). Be to, nustatyta, kad HNA yra stabilios prieš fermentinį skaidymą (Kolb ir kt., 2005 D ’Alonzo ir kt., 2009). Tačiau šių modifikacijų antisense efektas gali būti siejamas tik su steriliu tikslinės mRNR blokavimu, nes jie neaktyvina RNazės H (Hendrix ir kt., 1997). Morfolino oligonukleotiduose (MF) ribozė pakeičiama morfolino dalimi ir naudojamos fosforodiamidato jungtys (Abramova ir kt., 2009). Panašiai kaip ir PNA, šios modifikacijos neaktyvina RNazės H ir gali būti naudojamos tik kaip steriniai blokatoriai, slopinantys genų ekspresija biologinėje sistemoje. Jie yra stabilūs prieš nukleazes ir turi panašų afinitetą į izosekvencinius nemodifikuotus ASON. Kadangi MF stuburas nėra įkrautas, mažai tikėtina, kad jie turės nepageidaujamą sąveiką su baltymais, tačiau, kita vertus, tai turi įtakos jų įsisavinimui ląstelėse (Amantana ir Iversen, 2005 Iversen ir kt., 2009).

Ribozimai yra RNR fermentai, kuriuos pirmą kartą aprašė Tetrahymena thermophilia Cech ir kt. (1981). Jie yra katalizinės RNR, skaldančios kovalentines jungtis tikslinėje RNR. Katalizinė vieta yra konformacijos, priimtos RNR-RNR komplekso, rezultatas esant dvivalenčiams katijonams. Ribozimai yra tikri katalizatoriai ir gali atlikti RNR pjaustymą transesterifikacijos būdu (splicesome) ir peptidilo perkėlimu (ribosomose) (Doudna ir Lorsch, 2005). Šios molekulės, turinčios dar didesnį potencialų pranašumą nei antisense oligodeoksinukleotidai, gali specifiškai surišti ir suskaidyti mRNR substratą. Yra pranašumų, kai vietoj antisense oligodeoksinukleotidų naudojami ribozimai. Ribozimai gali inaktyvuoti tikslinę RNR, nepasikliaudami ląstelės šeimininkės mechanizmais, ir jie turi galimybę atskirti daugiau nei vieną tikslinės RNR kopiją, atsiskirdami nuo skilimo produktų ir prisijungdami prie kitos tikslinės molekulės. Yra keli ribozimų tipai, du dažniausiai naudojami tyrimams ir terapijai: plaktuko galvutės ribozimas ir segtuko ribozimas (Fedor ir Westhof, 2002 Bevilacqua ir Yajima, 2006). Dauguma iki šiol atliktų tyrimų aprašė ribozimų kaip terapinių agentų naudojimą virusinėms ir vėžio ligoms gydyti (Khan, 2006 Spizzo ir kt., 2009). Tačiau kai kurie dominuojantys genetiniai sutrikimai taip pat gali būti naudingi. Tai pasakytina apie kai kuriuos jungiamojo audinio sutrikimus, tokius kaip osteogenesis imperfecta, marfano sindromas ir kraniosinostoziniai sindromai (Wood ir kt., 2007). Geresnis ribozimų veikimo supratimas ir jų funkcijos optimizavimo metodai padidins jų, kaip galimų terapinių agentų, patrauklumą.

Tik neseniai tyrimai antisense srityje padarė didesnę įtaką atradus RNR trukdžius (RNAi) (Downward, 2004). Šis natūraliai atsirandantis reiškinys, kaip stiprus sekos specifinis mechanizmas po transkripcijos genų nutildymui, pirmą kartą buvo aprašytas nematodų kirminui Caenorhabditis elegans (Fire ir kt., 1998). RNR trukdžius inicijuoja ilgos dvigubos RNR molekulės (dsRNR), kurios yra apdorojamos 21-23 nukleotidų ilgio RNR, vadinamos Dicer fermento trumpomis trukdančiomis RNR (siRNR) (Bernstein ir kt., 2001 Hammond, 2005). Šios mažos trukdančios RNR (siRNR) yra įtraukiamos į RNR sukeltą slopinimo kompleksą (RISC), baltymo RNR kompleksą, ir vadovauja nukleazei, kuri skaido tikslinę RNR (Chen ir kt., 2005). Taigi manoma, kad jis suteikia žymiai didesnį stiprumą, palyginti su tradiciniais antisense metodais. Iš esmės RNR trukdžiai gali būti naudojami bet kuriai ligai, susijusiai su padidėjusia identifikuoto geno ekspresija, gydyti. Tai gali būti tinkama kovai su virusinėmis ligomis, vėžiu ir uždegiminėmis ligomis. Išties, į audinių kultūra modelių, įspūdingi rezultatai buvo pasiekti prieš įvairias vėžio ląsteles, naudojant RNR trukdžius onkogenams nukreipti, o prieš ŽIV, gripo ir poliomielito virusus taikant viruso genus (Damm-Welk ir kt., 2003). siRNR veikia prieš įvairius virusus, ŽIV, hepatito C virusą (HCV), hepatito B virusą, papilomos virusą, herpeso virusą, rotavirusą ir gripo virusą, buvo išbandyti ląstelių kultūrose ir parodė didelį efektyvumą slopinant virusinę infekciją ir replikaciją (Jacque ir kt. , 2002 Yokota ir kt., 2003 Hamasaki ir kt., 2003 Hall ir Alexander, 2003 Jia ir Sun, 2003 Dector ir kt., 2002 Ge ir kt., 2003 Zamore ir Aronin, 2003).

ANTISENSINĖS TERAPIJOS PRIVALUMAI VISOJE TRADICINĖJE NARKOTIKŲ TERAPIJOJE

Yra keletas antisense terapijos, naudojant oligonukleotidus, aspektų, kurie gali būti naudingi, palyginti su tradiciniais vaistų mechanizmais (Askari ir McDonnell, 1996 Malik ir Roy, 2008 Guanghui ir Agarwal, 2009).

Oligonukleotidai gali būti pagaminti greitai, kai kurių per savaitę reikia tik mRNR sekos
Tikslas dažnai yra vienmatis (priešingai nei kelių matmenų domenai, dažnai nukreipti į baltymus) jautrumą galima išmatuoti nuskaitant duomenų bazę, ieškant žinomų genų, arba atliekant šiaurinį/pietinį blotinimą nežinomiems genams.
MRNR ekspresijos slopinimas sukels greitesnį ir ilgesnį klinikinį atsaką nei ribosomos suformuoto baltymo slopinimas, kurio tikslas yra įprastas gydymas vaistais
Vandenilio ryšys tarp oligonukleotido ir mRNR taikinio viršija keletą dydžių, palyginti su Van der Waals ir kitomis jėgomis, reikalingomis baltymų taikiniams surišti
ASON kaupiasi tam tikruose organuose ir audiniuose, tokiuose kaip kepenys, blužnis, inkstai, kaulų čiulpai, riebalų ląstelės. Jie gali būti vartojami keliais būdais, ty peroraliniu, tiesiosios žarnos, poodiniu, intraveniniu, intratekaliniu, intravitrealiniu, aerozoliniu ir vietiniu.

ANTISENSE agentų terapinės programos

Galimą antisense oligonukleotidų panaudojimą riboja tik turima genetinė informacija. Antisense oligonukleotidai gali būti sukurti prieš bet kurį taikinį, kuriame baltymų gamybos slopinimas arba RNR apdorojimo slopinimas duoda terapinį rezultatą. Šiuo metu klinikiniai tyrimai atliekami naudojant antisense oligonukleotidus reumatoidiniam artritui, psoriazei, inkstų persodinimo atmetimui ir uždegiminei žarnyno ligai (Krono ir#146s liga) gydyti (5 pav.) (Fichou ir Ferec, 2006).

Tačiau pagrindiniai taikiniai išlieka atsparios virusinėms ligoms ir vėžiui, dėl kurių paprastai yra reikalinga tikslinė genetinė informacija. Toliau pateikiami kai kurie pagrindiniai antisense agentai atliekant klinikinius įvairių ligų tyrimus (1 lentelė).

1 lentelė: Kai kurie Antisense agentai klinikiniuose hematologijos ir onkologijos tyrimuose
CMV: citomegalovirusas, HCV: hepatito C virusas, HSP: karščio šoko baltymas, IGFBP: į insuliną panašus augimo faktorių surišantis baltymas, NHL: ne Hodžkino limfoma, NSCLC: nesmulkialąstelinė plaučių karcinoma, LML: lėtinė mieloidinė leukemija

ANTISENSE agentai Vėžio terapijoje

Naujos naujos vėžio gydymo strategijos yra pagrįstos selektyviu specifinių molekulinių taikinių, dalyvaujančių neoplastinio vystymosi ir progresavimo procese, reguliavimu (Elsayed ir Sausville, 2001). Kadangi vėžio terapijos tikslas tampa racionalizuotas, kad būtų nukreiptas į konkretesnius biologinius kelius, genetinius komponentus ir (arba) ląstelių baltymus, antisense terapijos, naudojant oligonukleotidus, vaidmuo vystosi kaip potenciali gydymo strategija kovojant su vėžiu. I fazėje buvo išbandyta daugybė antisense oligonukleotidų prieš skirtingus genus, koduojančius svarbius ląstelių baltymus, dalyvaujančius vėžio ląstelių signalizavime, proliferacijoje ir išgyvenime, įskaitant baltymų kinazę A, baltymų kinazę C, c-raf, bcl-2 ir kt. II klinikiniai tyrimai (Cho-Chung, 1999 Tamm ir kt., 2001 Gewirtz, 2000). Nors nė vienas antisense agentas nebuvo patvirtintas vėžiui gydyti, jų judėjimas link galimo naudojimo būsimose klinikinėse onkologinėse situacijose yra akivaizdus. Įvairūs baltymų taikiniai ir antisense agentai klinikiniuose vėžio gydymo tyrimuose yra šie:

Bcl-2: Ląstelių mirties (apoptozės) reguliavimas dažnai turi įtakos piktybinių ligų vystymuisi ir gali būti susiję su visais molekuliniais etapais nuo tarpląstelinių signalų receptorių per tarpląstelinius kelius, ląstelių mirties reostatus ir ląstelių mirties budelius. Bcl-2 yra anti-apoptotinis anti- ir pro-apoptotinių baltymų šeimos narys, kuris yra reguliuojamas įvairių vėžio formų ir yra specifiškai per daug išreikštas per chromosomų perkėlimą kai kuriose ne Hodžkino limfomose (Gross ir kt., 1999 Kang ir Reynolds , 2009). Vienas iš perspektyviausių klinikinio vystymosi antisense oligonukleotidų yra 18 merų fosforotioato (PS) -oligonukleotidas, nukreiptas į žmogaus bcl-2 mRNR, yra G3139, Genasense (oblimerseno natris). G3139 buvo įvertintas daugelyje II/III fazės tyrimų, kuriuose buvo tiriami įvairūs piktybiniai navikai, įskaitant melanomą, ne Hodžkino limfomą (NHL) ir prostatos vėžį, kuriuose buvo įrodyta priešnavikinė veikla (Jansen ir kt., 2000 Gjertsen ir kt.). ., 2007 Tarhini ir Kirkwood, 2007 Shah ir kt., 2009). „Genasense“ parodė sąveiką su keliais chemoterapiniais preparatais, spinduline terapija ir imunoterapija ir dažnai skiriama likus kelioms dienoms iki standartinės terapijos. Be to, Genasense buvo įvertintas arba yra vertinamas kartu su šiais preparatais: Gleevec, Rituxan, Paclitaxel, Camptosar, Fludara, Cyclophosphamide, Taxotere, Mylotarg, Dexamethasone and Cytosine arabinoside (Chanan-Khan ir kt., 2004 Benimetskaya ir kt. , 2005 Knox ir kt., 2008).

c-raf: Raf kinazės yra serino/treonino kinazės, reguliuojančios mitozinius signalizacijos kelius, ypač mitogeno aktyvuotos baltymų kinazės kelias (MAPK), kuris perduoda ras signalus (Skolnik ir kt., 1993). Buvo pranešta, kad c-raf jungiasi prie bcl-2 ir dalyvauja reguliuojant apoptozę (Wang ir kt., 1996).Raf/MAPK tarpląstelinio signalo reguliuojamas kinazės kelias turi didelį poveikį proliferaciniams, apoptoziniams ir diferenciacijos keliams, taip pat jautrumui ir atsparumui chemoterapiniams vaistams (McCubrey ir kt., 2009 Kaur ir kt., 2010). „Isis“ sukūrė 20-metrį fosforo-oligonukleotidą ISIS 5132, skirtą c-raf-1 3'-neišverstam regionui (UTR) (Monia ir kt., 1996). ISIS 5132 in vitro tyrimai, naudojant A549 plaučių ląsteles, parodė c-raf-1 mRNR slopinimą. Kitų I fazės klinikinių ISIS 5132 klinikinių tyrimų, atliktų pacientams, sergantiems įvairiais pažengusiais solidiniais navikais, rezultatai parodė, kad vaistas paprastai yra gerai toleruojamas ir turi tik lengvą šalutinį poveikį, kuris paprastai buvo toks pat, kaip ir gydymas fosforotioatu (Rudin ir kt.). ., 2001). ISIS 5132 galima saugiai derinti su standartinėmis karboplatinos ir paklitakselio dozėmis gydant nesmulkialąstelinį plaučių vėžį (Fidias ir kt., 2009). Kitas raf-1 ASON, LErafAON (Neo-Pharm) yra 15 merų antisense oligodeoksinukleotidas (ASON), nukreiptas į c-raf-1 mRNR vertimo inicijavimo vietą, taip pat buvo pradėtas klinikinių tyrimų metu. LErafAON taip pat yra pirmasis ASON turintis liposominis vaistas, išbandytas žmonėms. Šio ASON PS modifikacija apsiriboja tik terminalo baze 3 'ir 5' gale. „LErafAON“ buvo įtrauktas į katijoninę liposomą, kad apsaugotų ASON nuo skilimo ir pagerintų jų pusinės eliminacijos laiką. Ikiklinikiniai šio vaisto tyrimai parodė naviko augimo slopinimą, daugiau nei 50% raf-1 ekspresijos slopinimą naviko ksenografuose ir padidėjusį naviko ląstelių jautrumą radiacijai ir chemoterapiniams vaistams. I fazės LErafAON tyrimas parodė, kad į veną, vaisto pristatymas yra gerai toleruojamas kartu su paliatyviąja radioterapija (Pei ir kt., 2004 Dritschilo ir kt., 2006).

Baltymų kinazė C-α: Baltymų kinazė C (PKC) yra serino/treonino kinazių šeima, dalyvaujanti perduodant ląstelių proliferacijos ir diferenciacijos signalus. Dėl svarbaus PKC vaidmens procesuose, susijusiuose su neoplastine transformacija, kancerogeneze ir naviko ląstelių invazija, jis tampa potencialiai tinkamu priešvėžinės terapijos taikiniu (Mackay ir Twelves, 2003). „Isis/Eli Lilly“ sukūrė 20 m fosforo-oligonukleotidą ISIS 3521 (dar vadinamą LY900003 arba „Affinitak“ arba „Aprinocarsen“), skirtą PKC 3'-UTR-α (Roychowdhury ir Lahn, 2003). ISIS 3521 I fazės tyrimai buvo sėkmingai atlikti pacientams, sergantiems gydymui atspariais solidiniais navikais. Ląstelių kultūros tyrimuose įrodyta, kad „Affinitak“ slopina mRNR ir baltymų ekspresiją A549 plaučių ir T24 šlapimo pūslės karcinomos ląstelėse, dėl to slopina proliferaciją esant 100-200 nM koncentracijai (Cripps ir kt., 2002 Holmlund, 2003). I/II fazės tyrimai, vertinantys ISIS 3521 ir chemoterapinių vaistų derinį, buvo pradėti pacientams, sergantiems III B arba IV stadijos nesmulkialąsteline plaučių karcinoma (NSCLC) (Villalona-Calero ir kt., 2004 Ritch ir kt., 2006 Luis ir kt., 2006).

H-ras: esant nenormaliai Ras baltymų ekspresijai, dažnai pastebima onkogeninė transformacija, todėl ras yra perspektyvus terapinis taikinys (Saxena ir kt., 2008, Kaur ir kt., 2010). 20 bazių fosforotioatas ASON (ISIS 2503), jungiantis prie žmogaus H-ras mRNR transliacijos iniciacijos srities, selektyviai sumažino H-ras mRNR ir baltymų ekspresiją ląstelių kultūroje (Cunningham ir kt., 2001). Kitų šeimos narių, įskaitant N-ras, Ki-rasA ir Ki-rasB, išraiškai ISIS 2503 įtakos neturėjo in vitro . I fazės tyrimo metu ISIS 2503 nesukėlė dozę ribojančio toksiškumo, skiriant iki 10 mg/kg kūno svorio per parą 14 dienų nepertraukiamai į veną, infuziją kas 3 savaites. ISIS 2503 kartu su chemoterapija dabar yra II fazės klinikinių tyrimų metastazėms gydyti krūties vėžys , kasos vėžys ir NSCLC (Adjei ir kt., 2003 Alberts ir kt., 2004).

DNR metiltransferazė: teigiama, kad fermento DNR metiltransferazės hipermetilinimas inaktyvuoja naviko slopinimo genus, dėl to atsiranda neoplastinė transformacija ir naviko atsiradimas (Reid ir kt., 2002 Gore, 2009 Issa ir Kantarjian, 2009). Todėl agentai, kurie užkerta kelią arba pakeičia DNR metilinimą, gali atkurti normalią vėžio ląstelių augimo kontrolę (Ibrahim, 2010). MG 98 yra fosforotioatas ASON, kuris yra labai specifinis žmogaus DNR metiltransferazės mRNR transliacijos inhibitorius, kurio IC50 vertės yra 50–70 nM ląstelių linijose (Amato, 2007). Vartojant MG 98 žmogaus plaučių ir gaubtinės žarnos vėžio ksenografuose, buvo pastebėtas naviko augimo sulėtėjimas ir regresija. II fazės tyrimai šiuo metu atliekami pacientams, sergantiems galvos ir kaklo bei metastazavusiu inkstų vėžiu (Davis ir kt., 2003 Winquist ir kt., 2006 Plummer ir kt., 2009).

Klasterinas: Klasterinas yra glikoproteinas, turintis beveik visur esančią audinių ekspresiją ir akivaizdžiai dalyvaujantis įvairiuose biologiniuose procesuose. Klasterinas veikia kaip ląstelių išgyvenimo baltymas, kuris yra per daug išreikštas reaguojant į naviko naikinimo strategijas, tokias kaip chemoterapija, hormonų abliacija ir spindulinė terapija. Pernelyg didelė klasterino ekspresija pailgina ląstelių išgyvenimą ir padidina vėžio ląstelių metastazavimo potencialą in vitro (Wei ir kt., 2009). OGX-011 (OncoGeneX Technologies Inc.) yra antros kartos ASON, papildantis žmogaus Clusterin mRNR vertimo inicijavimo vietą. OGX-011 turi fosforotioato pagrindą su 2-metoksietilo (MOE) modifikacijomis į keturias bazes abiejuose 21-merų molekulės galuose (Chi ir kt., 2008a). Tokios „gapmer“ modifikacijos išlaiko geresnį antrosios kartos chemijos audinių farmakokinetinį profilį, tačiau išlaiko didelį afinitetą tikslinei mRNR ir aktyvumui būtiną RNazės H įdarbinimą. II fazės kombinuoto OGX-011 ir chemoterapijos tyrimai tęsiami pacientams, sergantiems prostatos, krūties ir plaučių vėžiu (Chi ir kt., 2008b Chia ir kt., 2009).

Transformuojantis augimo faktorius-⓶: per didelė citokinus transformuojančio augimo faktoriaus beta 2 (TGF-⓶) ekspresija yra įvairių piktybinių navikų, įskaitant kasos karcinomą, piktybinę gliomą, metastazuojančią melanomą ir metastazavusią kolorektalinę karcinomą, požymis. Taip yra dėl pagrindinio TGF vaidmens-⓶, nes jis reguliuoja pagrindinius naviko vystymosi mechanizmus, būtent imunosupresiją, metastazes, angiogenezę ir proliferaciją (Flanders ir Burmester, 2003 BonaFoux ir Lee, 2009). Pažangiausi ASON, skirti aukšto lygio gliomų gydymui, yra fosforotioatu modifikuotas ASON, AP 12009 (trabedersenas), kuris nukreiptas į mRNR, koduojančią TGF-ir#9462. AP 12009 švirkščiamas į vidų, naudojant konvekcijos sustiprintą tiekimą. I ir II fazės klinikinių tyrimų serija įvertino toksiškumo profilį ir optimalią medžiagos dozę (Hau ir kt., 2007 Hau ir kt., 2009 Schlingensiepen ir kt., 2008).

Survivinas: Survivinas yra vienas iš labiausiai specifinių vėžiui baltymų, nustatytų iki šiol ir yra reguliuojamas beveik visuose žmogaus navikuose. Biologiškai įrodyta, kad survivinas slopina apoptozę, skatina proliferaciją ir skatina angiogenezę. Dėl padidėjusio piktybinių navikų reguliavimo ir pagrindinio vaidmens apoptozėje, proliferacijoje ir angiogenezėje, šiuo metu survivinas sulaukia didelio dėmesio kaip naujas priešvėžinio gydymo tikslas. Įrodyta, kad keliose gyvūnų modelių sistemose survivino sumažėjimas arba jo funkcijos inaktyvavimas slopina naviko augimą (Ambrosini ir kt., 1997 Mita ir kt., 2008). Survivinas yra labai išreikštas įvairiuose žmogaus vėžio tipuose, įskaitant plaučių, storosios žarnos, kasos, prostatos, krūties ir skrandžio navikus. Įdomu tai, kad survivinas yra ekspresuojamas priklausomai nuo ląstelių ciklo, kai G2/M lygis yra didžiausias, o po ląstelių ciklo sustabdymo greitas sumažėjimas. Mitozės pradžioje survivinas asocijuojasi su mitoziniu velenu, o šios sąveikos sutrikimas praranda antiapoptozinę funkciją. Tačiau LY2181308/ISIS 23722 yra antros kartos 2-MOE ASON, kuris stipriai ir konkrečiai reguliuoja survivino ekspresiją daugelyje žmogaus vėžio ląstelių, įskaitant plaučius, gaubtinę žarną, kasą, krūtį ir prostatą (Pennati ir kt., 2007 Ryan ir kt.) al., 2009).

XIAP: X-susietas žinduolių apoptozės baltymo inhibitorius (XIAP) buvo pirmasis identifikuotas IAP ir įrodyta, kad jis jungiasi su keliais partneriais. XIAP yra labai išreikštas ūmine mieloidine leukemija (AML), glioblastoma, prostatos, kasos, skrandžio ir kolorektaliniais navikais (Salvesen ir Duckett, 2002 Sasaki ir kt., 2000). AEG35156/GEM640 (Aegera Therapeutics Inc.) yra 19-meras ASON, skirtas žmogaus XIAP mRNR, apimantis 2'-O-metilo chemiją su fosforotioato pagrindu. In vitro ir in vivo ikiklinikiniai koncepcijos įrodymų tyrimai parodė, kad XIAP baltymų ekspresijos slopinimas AEG35156/GEM640 padidina priešnavikinį chemoterapijos aktyvumą keliuose ksenotransplantacijos modeliuose (Hu ir kt., 2003). Jungtinėje Karalystėje šiuo metu vykdomas I fazės dozės didinimo AEG35156, kaip vienintelio agento, toleravimo tyrimas kaip 7 dienų nepertraukiama intraveninė infuzija pacientams, sergantiems pažengusiais navikais, ir I fazės tyrimai, kuriuose vertinamas trumpesnis infuzijos grafikas kartu su docetakseliu arba chemoterapija. AML (ūminė mieloidinė leukemija) (Lacasse ir kt., 2005 Cummings ir kt., 2005 Lacasse ir kt., 2006).

Tymidylate Synthase (TS): Tymidylate Synthase (TS) yra pagrindinis fermentas DNR sintezėje ir vėžio chemoterapinių agentų taikinys (Rose ir kt., 2002 Bertino, 2009). Oligodeoksinukleotidai (ODN) yra nukreipti į skirtingus TS mRNR regionus, slopina žmogaus naviko ląstelių proliferaciją kaip atskiri agentai ir padidina kliniškai naudingų TS baltymą nukreipiančių vaistų citotoksiškumą. ODN 491, naujas 20mer AS ODN, papildantis anksčiau netaikytą TS mRNR koduojančios srities dalį. AS ODN 491 skirtingu laipsniu sumažino TS mRNR lygį žmogaus naviko ląstelių linijose ir sukėlė skirtingą fiziologinį poveikį, priklausomai nuo naviko ląstelių linijos. ODN 491 (kaip ir ODN 83, anksčiau įrodyta kaip veiksminga) sumažino TS baltymų kiekį HeLa ląstelėse, kartu padidindamas jautrumą chemoterapiniams vaistams, nukreiptiems į TS (Flynn ir kt., 2006 Jason ir kt., 2008).

Ribonukleotidų reduktazė: Ribonukleotidų reduktazė (RNR) yra svarbus ląstelių dalijimosi ir naviko augimo fermentas, reikalingas ribotam ribonukleotidų pavertimui dezoksiribonukleotidais, o tai yra esminis DNR sintezės ir taisymo žingsnis (Fan ir kt., 1998). Žinduolių RNR turi dimerinę struktūrą, susidedančią iš dviejų skirtingų subvienetų - R1 ir R2, užkoduotų skirtingose ​​chromosomose ir kiekviena atskirai neaktyvi. Abu subvienetai susideda iš nukleotidų surišimo vietos (M1) ir metalo surišimo vietos (M2). M1 veikiantys RNR inhibitoriai yra nukleozidų analogai, pavyzdžiui, gemcitabinas. M2 sudėtyje yra nehemo geležies ir tirozino laisvųjų radikalų kurie reikalingi fermentiniam ribonukleotidų redukcijai. M2 inhibitoriai veikia naikindami laisvųjų radikalų . Hidroksiurėja yra kliniškai patvirtintas RNR inhibitorius, veikiantis geležį laisvųjų radikalų vietoje, tačiau slopinimas yra grįžtamasis dėl lengvo tirozino regeneracijos. laisvųjų radikalų žinduolių ląstelės (Cerqueira ir kt., 2007). R1 subvieneto baltymų kiekis ląstelių ciklo metu yra pastovus, tačiau R2 subvieneto ekspresija padidėja vėlyvoje ląstelių ciklo G1/ankstyvoje S fazėje, kai vyksta DNR replikacija. Taip pat buvo įrodyta, kad R2 subvienetas yra pernelyg išreikštas naviko audiniuose ir, atrodo, turi įtakos kai kurių onkogenų transformacijai ir piktybiniam potencialui. GTI-2501 ir GTI-2040 (Lorus Therapeutics Inc.) yra pirmosios kartos fosforotioato antisense molekulės, nukreiptos ir slopinančios atitinkamai RNR R1 ir R2 subvienetų ekspresiją (Desai ir kt., 2005). Buvo pranešta apie I fazės GTI-2040 tyrimą ir pastebėta dozę ribojantis kepenų fermentų padidėjimo toksiškumas (Yoon ir kt., 2006). Rekomenduojama II fazės dozė buvo 185 mg m 2 d -1, vartojama 21 dienos nepertraukiamos infuzijos būdu. I fazės GTI-2501 ir GTI-2040 deriniai su docetakseliu buvo baigti, o šių kombinuotų režimų II fazės bandymai vyksta (Leighl ir kt., 2009).

VIRALINIŲ INFEKCIJŲ PRIEMONĖS

Oligonukleotidai daug žada gydyti virusines infekcijas. Nors pastaruoju metu daug dėmesio buvo skiriama mažoms trukdančioms RNR, dauguma oligonukleotidų, kurie iki šiol buvo tiriami kaip antivirusiniai agentai, yra modifikuoti oligodeoksinukleotidai (ODN), skirti veikti naudojant antisense mechanizmą.

Citomegalovirusas: Citomegalovirusas (CMV) priklauso Herpes-viridae virusų šeimai, kuri yra DNR virusas, pasižymintis vėlavimo ir reaktyvacijos biologinėmis savybėmis. Išsivysčiusiose šalyse iki 80% žmonių išsivysto subklinikinės CMV infekcijos (Mocarski, 1988). CMV retinitas yra viena iš labiausiai paplitusių oportunistinių infekcijų pacientams, sergantiems įgytu imunodeficito sindromu (AIDS). AIDS sergantiems pacientams, užsikrėtusiems CMV retinitu, gali išsivystyti netoleravimas arba atsparumas dažniausiai naudojamoms anti-CMV gydymo schemoms, todėl reikia sukurti alternatyvias gydymo galimybes (Hoffman ir Skiest, 2000). Daugelis ASONs atliekamų CMV replikacijos slopinimo tyrimų daugiausia buvo skirti CMV greitojo ankstyvojo (IE) genų produktų slopinimui. ISIS 2922 („Fomivirsen“ dar vadinamas „Vitravene ISIS Pharmaceuticals“), PS-ASON, turintis 21 nukleotidų seką, papildančią IE2 RNR, parodė bent 30 kartų stipresnį antivirusinį aktyvumą, palyginti su nukleozidų analoginiu gangcikloviru. Rezultatai parodė, kad ISIS 2922 slopina viruso gamybą specifiniu ir nuo dozės priklausomu būdu (Azad ir kt., 1993). Iki šiol FDA buvo patvirtintas tik vienas junginys, fomivirsenas, pirmasis genų terapinis agentas. Fomivirseno patvirtinimas buvo svarbus visai antisense technologijai, nes jis parodė, kad antisense vaistai gali būti veiksmingai naudojami gydant vietinę ligą. I, II ir III fazės tyrimų rezultatai parodė, kad ISIS 2922 injekcijos į stiklakūnį yra saugios ir veiksmingos. Šis vaistas sustabdė ūminio ir lėtinio CMV retinito progresavimą AIDS sergantiems pacientams. Be to, vietinis gydymas vaistu sumažino sisteminio šalutinio poveikio dažnį. Dažniausiai pasireiškęs šalutinis poveikis buvo padidėjęs akispūdis ir lengvas ar vidutinio sunkumo akies uždegimas, kurie abu buvo laikini arba gydomi vietiniu steroidų gydymu (Schreiber ir kt., 2009 Andrei ir kt., 2009). Po sėkmingų klinikinių tyrimų 1998 m. FDA patvirtino ISIS 2922, skirtą AIDS sergantiems pacientams gydyti CMV sukeltą retinitą, ir tapo pirmuoju komerciškai parduodamu ASON vaistu (Haasnoot ir Berkhout, 2009). Antrosios kartos ASON, kurio seka tokia pati kaip fomivirseno, ISIS 13312, yra 2'-MOE ASON, kuris, kaip įrodyta, turi antivirusinį aktyvumą, panašų į fomivirseną fibroblastuose ir tinklainės pigmento epitelio ląstelėse (Mansoor ir Melendez, 2008 Detrick ir kt.). , 2001). Tiek fomivirsenas, tiek ISIS 13312 parodė panašų ir pastovų antivirusinį aktyvumą su IC 50 nuo 0,1 iki 1,0 μM (Henry ir kt., 2001). Kiti virusai, pasireiškiantys akių būkle priekiniame segmente, yra herpes simplex (HSV), Varicella-Zoster (VZV), Epstein-Barr (EBV) ir adenovirusas. Tarp jų HSV-1 dažniausiai siejamas su akių infekcijomis ir yra pagrindinė ragenos aklumo priežastis. Taikymas į HSV-1 yra dar viena galimybė ASON, kaip terapiniams agentams, kurie nebuvo visiškai sukurti oftalmologijai.

Hepatito C virusas: Hepatito C infekcija yra kepenų uždegimas, kurį sukelia hepatitas C virusas. Pasaulio sveikatos organizacijos duomenimis, maždaug 170 milijonų žmonių visame pasaulyje yra chroniškai užsikrėtę HCV (Kamal, 2008). Tai labiausiai paplitusi lėtinė per kraują plintanti infekcija išsivysčiusiame pasaulyje ir pagrindinė kepenų persodinimo priežastis JAV. Tačiau šiuo metu turimi anti-HCV junginiai nėra plačiai veiksmingi, ypač prieš lėtinę HCV infekciją. Todėl nuolat stengiamasi kurti naujesnes ir geresnes terapines strategijas (Tan ir kt., 2002 O ’Leary ir Davis, 2010). Citozolinė virusinė vienos grandinės RNR (ssRNR) taip pat yra pažeidžiamas potencialus terapinių antisensinių oligonukleotidų taikinys. Vidinė ribosomų įėjimo vieta (IRES) viruso RNR 5 ’gale yra tas labai konservuotas taikinys. IRES yra nusileidimo aikštelė, nukreipianti teigiamą HCV-RNR grandinę į endoplazminį tinklelį (ER) baltymų transliacijai. Taigi, slopinant IRES prisijungimą prie ląstelių ir virusinių baltymų oligonukleotidais, galima veiksmingai slopinti HCV replikaciją. ISIS 14803 yra 20 vienetų 5'-metilcitidino antisense fosforotioato oligodeoksinukleotidas, kuris jungiasi prie (HCV) RNR vidinės ribosomų įėjimo vietos (IRES) transliacijos inicijavimo srityje ir slopina baltymų ekspresiją ląstelių kultūroje ir pelių modeliuose (McHutchison ir kt. , 2006). Šis II fazės atviras ISIS 14803 dozės didinimo tyrimas buvo atliktas lėtinėmis HCV sergančiais pacientais (Gordon ir kt., 2002).

Žmogaus imunodeficito virusas (ŽIV): ŽIV yra vienos grandinės RNR virusas, kuris naudoja atvirkštinę transkriptazę (RT), kad sukurtų savo RNR genomo DNR kopiją. Tada viruso DNR integruojama į šeimininko DNR, o vėliau ląstelė šeimininkė ją perrašo ir išverčia. ŽIV infekcija plinta visame pasaulyje nerimą keliančiu greičiu, o tai reiškia, kad sunku kontroliuoti viruso dauginimąsi. Daugelis ŽIV genomo regionų buvo taikomi ASON, įskaitant rev, tat, gag, pol ir env genus, 5 'neišverstą sritį ir psi sekas. Įrodyta, kad įvairūs ASON yra veiksmingi sergant ūmiomis ir lėtinėmis virusinėmis infekcijomis (Suzuki ir kt., 2002). Buvo įrodyta, kad GEM 91 (Hybridon), 25 merų PS-ASON, jungiantis prie ŽIV gag mRNR vertimo pradžios vietos, veiksmingai sumažina ŽIV replikaciją in vitro (Yamaguchi ir kt., 1997). Nors pirminės GEM 91 klinikinių tyrimų ataskaitos parodė, kad jis yra gerai toleruojamas (Sereni ir kt., 1999), vėliau jo vartojimas buvo nutrauktas dėl dozę ribojančios trombocitopenijos ir padidėjusio transaminazių kiekio serume. GEM 92 yra geriamasis antrosios kartos ASON, sintezuotas sutrumpinta GEM 91 seka (Zheng, 1999). GEM 92 šiuo metu yra I fazės klinikinių tyrimų, ikiklinikinių tyrimų rezultatai rodo geresnį stabilumą ir saugumą (Pandey ir kt., 2009).

Astma dabar yra viena iš labiausiai paplitusių ilgalaikių ligų pasaulyje, ja serga net 300 milijonų žmonių visame pasaulyje. Pasaulio sveikatos organizacijos (PSO) duomenimis, iki 2025 m. Šis skaičius gali padidėti dar 150 mln. Be to, dabartinės terapijos nepavyksta atkurti imunologinio disbalanso, dažnai nesukelia optimali kontrolė astmos simptomų ir kartais yra susiję su neigiamu poveikiu (Humbert ir kt., 2007). Nepaisant to, kad pastaraisiais metais buvo padaryta didelė pažanga, vis dar skubiai reikia naujų, veiksmingesnių ir saugesnių vaistų nuo astmos. Svarbus molekulinės farmakologijos tikslas yra manipuliavimas genų ekspresija su naujomis vaistų molekulėmis. RNR pagrįstos genų nutildymo strategijos buvo pasiūlytos ne tik kaip tyrimo priemonės, bet ir kaip galimos terapinės intervencijos sergant alergine astma (Mahato ir kt., 2005 Popescu, 2005 Pan ir Clawson, 2006). Alerginei astmai gydyti ASON gali būti naudojamas nutildyti genų ekspresija , daugeliui molekulinių taikinių, ty ląstelių transkripcijos lygiu, ty ląstelių membranos receptorių (su G baltymu susietų receptorių, citokinų ir chemokinų receptorių), membraninių baltymų, jonų kanalų, citokinų ir susijusių veiksnių, signalizuojančių apie ne receptorių baltymų kinazes (tirozino kinazės, tokios kaip Syk ir serino/teonino kinazės, tokios kaip p38 MAP kinazė) ir transkripcijos reguliatoriai, priklausantys branduolinio receptoriaus tipo cinko pirštui CYS4 (GATA-3) arba beta pastolių faktoriai, turintys nedidelius griovelių kontaktus (p65, STAT-6). transkripcijos faktorių superklasės (Popescu ir Popescu, 2007 Adcock ir kt., 2008). Kvėpavimo sistemos ligos, įskaitant astmą, yra tinkamos inhaliacinėms terapijoms ir yra patraukli galimybė vietinėms antisense strategijoms.Žemiau pateikiami kai kurie svarbūs antisense agentų astmos tikslai.

Adenozino A1 receptorius: Adenozino A1 receptorius yra susijęs su uždegimu, bronchų susiaurėjimu ir paviršinio aktyvumo medžiagų išeikvojimu, stebimu astma ir kai kuriomis kitomis kvėpavimo takų ligomis (Spicuzza ir kt., 2006). Kvėpuojantys ASON (RASON), palyginti su sistemiškai vartojamais ASON, suteikia galimybę selektyviai sumažinti AR-1 ekspresiją plaučiuose, vartojant daug mažesnes dozes, taip pat sumažina sisteminio šalutinio poveikio ir toksiškumo riziką. EPI 2010 yra pirmosios kartos RASON, skirtas nukreipti į žmogaus A1 receptoriaus pradinį kodoną. MRNR yra 21-meras fosforotioatas, kuris, kaip įrodyta, slopina kiekvieną iš šių astmos aspektų ir yra veiksmingas daugelyje žmogaus astmos modelių, įskaitant primatą (Zhang , 2002). I/IIa fazės klinikinių tyrimų rezultatai parodė, kad EPI-2010 yra saugus ir gerai toleruojamas, o veiksmingumo rodikliai lengvi astma sergantiems pacientams yra nedideli (Ball ir kt., 2004). Vyksta tolesni klinikiniai tyrimai, siekiant nustatyti jo klinikinį veiksmingumą.

Mitogeno aktyvuotos baltymų kinazės (MAPK): tarp įvairių MAPK šeimų p38 dažniausiai yra susijęs su citokinų biosinteze ir uždegiminių ląstelių įdarbinimu (Pelaia ir kt., 2005). p38 MAPK yra nereceptorių prolino nukreipta serino/treonino kinazė, turinti pagrindinį vaidmenį aktyvinant uždegimines ląsteles (Schindler ir kt., 2007). Visų pirma, p38 MAPK reikšmingai prisideda prie neutrofilų pritraukimo, reguliuojant tarpląstelinės adhezijos molekulės-1 (ICAM-1) kraujagyslių ekspresiją ir TNF-α išsiskyrimą į oro erdves. Atrodo, kad p38 MAPK inhibitoriai turi pirmenybę slopinantį poveikį Th2 sintezei, palyginti su Th1 citokinais, o tai rodo jų galimą taikymą gydant atopines ligas. „p38 alpha MAPK ASON“ (ISIS 101757) yra 2 colių MOE-ASON, tiekiamas kaip aerozolis, skirtas inhaliacijoms arba tik nosies ekspozicijai, ovalbumino (OVA) jautrioms pelėms, sergančioms astma. Jis slopino p38 alfa mRNR ir baltymų ekspresiją Bronchoalveolar Lavage (BAL) skysčių ląstelėse ir peribronchinėse limfmazgių ląstelėse, sumažino gleivių hipersekreciją, slopino Th2 citokinų gamybą (IL-4, IL-5 ir IL-13 lygiai BAL skystyje) ir slopino kvėpavimo takus eozinofilija kvėpavimo takų hiperreaktyvumas (AHR) (Duan ir kt., 2005). Saugumo klausimai išlieka susirūpinimą keliantys ilgą laiką, nors aerozoliu tiekimas į kvėpavimo takus gali sumažinti šalutinį poveikį. Įdomu tai, kad nejautrumas kortikosteroidams, pastebėtas periferinių kraujo ląstelių ir makrofagų, gautų iš BAL skysčio pacientams, sergantiems sunkia astma, gali būti įveiktas derinant p38 MAPK inhibitorių ir deksametazoną (Adcock ir kt., 2008).

Interleukino receptorius ir C tipo C chemokino receptorių tipas: IL-4 receptorių alfa grandinė atlieka ypatingą vaidmenį sergant alergija, nes yra bendras IL-4 ir IL-13 receptorių komplekso subvienetas. Signalizavimas per jį IL-4 yra svarbus Th2 diferenciacijai, o jo gamybos blokavimas slopina IL-4 ir IL-13 aktyvumą, reguliuoja alerginį uždegimą, gleivių perprodukciją ir kvėpavimo takų hiperreaktyvumą (AHR) (Isidoro-Garc & iacutea ir kt., 2005). IL-4 receptorių alfa grandinė buvo tiriama kaip naujo įkvepiamo antrojo ASON taikinys. Vaistas ISIS 369645 yra antros kartos antisensinis interleukino 4 receptoriaus alfa subvieneto (IL4R-alfa) inhibitorius. Slopindamas IL4R-alfa gamybą slopina dviejų svarbių astmos citokinų-IL-4 ir IL-13-aktyvumą, kuris reguliuoja uždegimą, gleivių perteklių ir kvėpavimo takų hiperreaktyvumą (Oh ir kt., 2010). ISIS 369645 šiuo metu vertinamas 1 fazės tyrimuose. „Topigen Pharmaceuticals“ (Monrealis, Kvebekas, Kanada) neseniai pademonstravo pirmosios kartos antisensinio vaisto TPI-ASM8, kuris sujungia du oligonukleotidus į vieną įkvepiamą vaistą, saugumą, toleravimą ir farmakologinį aktyvumą pacientams, sergantiems lengva alergine astma. TPI-ASM8 yra dviejų ASON derinys, nukreiptas į du skirtingus ląstelių kelius, susijusius su alerginiu kvėpavimo takų uždegimu, slopindamas alerginių uždegiminių ląstelių verbavimąsi, veikdamas cisteino-cisteino CCR3 receptorius ir mažindamas alerginių uždegiminių ląstelių patvarumą trukdydamas bendras beta subvienetas interleukino 3, interleukino 5 ir granulocitų-makrofagų kolonijas stimuliuojančio faktoriaus (GM-CSF) receptoriams (Gauvreau ir kt., 2008). Tikimasi, kad šis novatoriškas daugialypis metodas blokuoti specifinių receptorių sintezę naudojant RNR slopinimo technologiją turės pranašumų prieš dabartinius vaistus, nes suteiks platesnį, bet specifinį farmakologinį aktyvumą. TPI ASM8 tiekiamas patogioje, ekonomiškai efektyvioje inhaliacinėje formoje, o sisteminė ekspozicija yra minimali, todėl iki šiol klinikinių tyrimų metu saugumo profilis yra palankus. Dabar TPI ASM8 yra II fazės klinikinės plėtros, skirtos vidutinio sunkumo ir sunkios astmos gydymui (S & eacuteguin ir Ferrari, 2009).

VAISTAI, NAUDOTI KITOMIS UŽDEGIMO LIGOMIS

Antisense oligonukleotidai buvo ištirti dėl jų terapinės naudos gydant įvairias uždegimines ligas, pvz. Reumatoidinis artritas , Krono liga (CD), opinis kolitas (UC), psoriazė ir kt. Toliau aptariami kai kurie svarbūs šių ligų modelių gydymo ASON tikslai.

Naviko nekrozės faktorius α: Naviko nekrozės faktorius α (TNF-α), taip pat žinomas kaip kachektinas, yra svarbus citokinas, vaidinantis vaidmenį šeimininko gynyboje. Citokinas gaminamas daugiausia makrofaguose ir monocituose, reaguojant į infekciją, invaziją, sužalojimą ar uždegimą. TNF-α sąveikauja su dviem skirtingais receptoriais-TNF I receptoriumi (TNFRI) ir TNF II receptoriumi (TNFRII), kad būtų galima perteikti jo poveikį, kurio grynasis rezultatas yra pakeistas genų ekspresija . Tarp ląstelių veiksnių, kuriuos sukelia TNF-α, yra interleukinas-1 (IL-1), interleukinas-6 (IL-6), interleukinas-8 (IL-8), interferonas-ir#947 (IFN-γ), Trombocitų išvestas augimo faktorius (PDGF) ir epidermio augimo faktorius (EGF) ir endotelio ląstelių adhezijos molekulės, įskaitant endotelio leukocitų sukibimo molekulę 1 (ELAM-1), tarpląstelinę adhezinę molekulę-1 (ICAM-1) ir kraujagyslių ląstelių sukibimo molekulę-1 (VCAM) -1) (Wajant ir kt., 2003). Nepaisant apsauginio citokino poveikio, per didelis TNF-α ekspresija dažnai sukelia ligas, ypač infekcines, uždegimines ir autoimunines ligas. Šis procesas gali apimti apoptozinius kelius (O ’Shea ir kt., 2002). Didelis plazmos TNF kiekis-α nustatytas sergant infekcinėmis ligomis, tokiomis kaip sepsio sindromas, bakterinis meningitas, smegenų maliarija, AIDS ir autoimuninės ligos, tokios kaip reumatoidinis artritas, uždegiminė žarnyno liga (įskaitant Krono ligą), sarkoidozė, išsėtinė sklerozė, Kawasaki sindromas, transplantato prieš šeimininką liga ir transplantacijos (alotransplantacijos) atmetimo ir organų nepakankamumo sąlygos, tokios kaip suaugusiųjų kvėpavimo distreso sindromas, stazinis širdies nepakankamumas, ūminis kepenų nepakankamumas ir miokardo infarktas (Lin ir kt., 2008). ISIS 104838 (ISIS Pharmaceuticals), 20 nukleotidų tarpininkas, nukreiptas į žmogaus TNF mRNR-α, yra pirmasis ASON, priklausantis antrajai kartai, išbandytas klinikiniuose tyrimuose (Kennewell, 2003). Ikiklinikiniai ISIS 104838 tyrimai parodė, kad jis veiksmingas gydant kolageno sukeltą artritą, kurio aktyvumas yra panašus į anti-TNF-ir#945 antikūnų, ir kad jis sėkmingai sumažina TNF-α ekspresiją 85% stimuliuojamuose keratinocituose. . Klinikinių tyrimų I fazėje ISIS 104838 buvo skiriama į veną arba į veną (Sewell ir kt., 2002). ISIS 104838 šiuo metu yra II fazės klinikiniai tyrimai, skirti reumatoidinio artrito (RA) ir Krono ligos (CD) gydymui (De Boer ir kt., 2007).

Tarpląstelinė adhezinė molekulė-1 (ICAM-1): tarpląstelinės adhezijos molekulės (ICAM) yra struktūriškai giminingos imunoglobulinų supergenų šeimos narės ir yra leukocituose esančių beta2 integrino molekulių ligandai. Iš penkių nustatytų ICAM ICAM-1 yra plačiausiai ištirtas. Nors ICAM-1 endotelio ląstelėse ir kai kuriuose limfocituose bei monocituose yra išreikštas konstituciškai, jo ekspresija gali žymiai padidėti esant citokinams (TNF-α, IL-1, IFN-γ) ir reaktyviosios deguonies rūšys . Priklausomai nuo ląstelių tipo, ICAM-1 dalyvauja prekyboje uždegiminėmis ląstelėmis, ląstelių ir ląstelių sąveikoje antigeno pateikimo metu, mikrobų patogenezėje ir signalo perdavimas per signalinius įvykius. Vėlgi, atsižvelgiant į ištirtą ląstelių tipą, buvo dokumentuota ICAM-1 jungtis, suaktyvinanti specifines kinazes fosforilinimo būdu, dėl to suaktyvėja transkripcijos faktorius ir padidėja citokinų gamyba, padidėja ląstelių membranos baltymų ekspresija, reaktyviųjų deguonies rūšių gamyba ir ląstelių dauginimasis (Hubbard ir Rothlein, 2000 Philpott ir Miner, 2008). ISIS 2302 (Alicaforsen) yra 20 bazių fosforotioato oligonukleotidas, nukreiptas į tarpląstelinę adhezinę molekulę-1 (ICAM-1), hibridizuojantis į seką žmogaus ICAM-1 mRNR 3 'neišverstame regione. Alicaforsen siūlo platų veiksmingumą gydant imunines ir uždegimines ligas (Barish, 2005 Baumgart ir Sandborn, 2007).

Į insuliną panašus I tipo augimo faktorius Jis priklauso didelei tirozinkinazės receptorių klasei. Šis receptorius tarpininkauja IGF-1, kuris yra polipeptidinis baltymo hormonas, panašus į insuliną (LeRoith ir kt., 1995 Rodon ir kt., 2008), poveikiui. I tipo į insuliną panašus augimo faktoriaus receptorius (IGF1R) reguliuoja kelis piktybinių navikų aspektus ir yra kelių šiuo metu klinikinių tyrimų metu taikomų vaistų taikinys (Saxena ir kt., 2007). Nors vietinis naudojimas ir vėlesnis didelių oligonukleotidų įsiskverbimas į normalią odą yra problematiškas, sutrikusi psoriazinių pažeidimų barjerinė funkcija leidžia įsisavinti antisensinius vaistus. ATL1101 yra antros kartos antisensinis vaistas, skirtas blokuoti IGF-1 receptoriaus, baltymo, dalyvaujančio reguliuojant psoriazės ląstelių augimą, sintezę. ATL 1101 yra pagrįstas „Isis Pharmaceuticals“ patentuota antrosios kartos antisense chemija, vadinama 2'-O-metoksietilu, ir yra kuriamas kaip kremas, skirtas vietiniam lengvų ar vidutinio sunkumo psoriazės atvejų gydymui (Sachdev ir kt., 2010 Ma ir kt. , 2009 White ir kt., 2004).

KARDIOVASKULINĖS LIGOS NAUDOTI VAISTAI

Hipercholesterolemija: Apolipoproteinas B yra svarbus struktūrinis baltymas ant aterogeninių lipoproteinų, tokių kaip likęs labai mažo tankio lipoproteinas ir mažo tankio lipoproteinas, paviršiaus ir palengvina šių dalelių pašalinimą iš kraujotakos, prisijungdamas prie mažo tankio lipoproteinų receptorių. Pernelyg didelė apolipoproteino B gamyba arba sumažėjęs receptorių sukeltas lipoproteinų klirensas lemia padidėjusį cholesterolio kiekį serume ir ankstyvą aterosklerozę (Krause, 2004 Chapman ir Caslake, 2004). Mipomersenas (ISIS301012) yra 20 bazių fosforotioato oligonukleotido, antros kartos antisensinio vaisto, sukurto „Isis Pharmaceuticals“, nonadekazodiumo druska, kuri slopina apolipoproteino B gamybą, tiesiogiai prisijungdama prie apolipoproteino B pasiuntinio RNR ir sumažindama jo ekspresiją (Kastelein ir kt., 2006 Fatima ir kt., 2007 Matthew, 2007). Klinikinio tyrimo metu ISIS 301012 50-400 mg, vartojama kas savaitę, švirkščiant po oda 4 savaites, apolipoproteino B kiekis sumažėjo 14,3-47,4% ir mažo tankio lipoproteinų cholesterolio kiekis 5,9-40% per 55 dienas. Dažniausias nepageidaujamas reiškinys buvo injekcijos vietos eritema, kuri savaime išnyko. Vyksta tyrimai, siekiant toliau apibrėžti ISIS 301012, kaip papildomo gydymo, saugumą, veiksmingumą ir farmakokinetiką pacientams, sergantiems heterozigotine ir homozigotine šeimine hipercholesterolemija (Kastelein ir kt., 2007 Athyros ir kt., 2008). Farmakokinetinės sąveikos su ezetimibu ir simvastatinu hipercholesterolemijai gydyti neįrodyta, atsižvelgiant į jo gebėjimą slopinti apolipoproteiną B-100 (apoB-100) (Yu ir kt., 2009). Ankstyvieji II fazės klinikinių ISIS-301012 tyrimų, kuriuose dalyvavo pacientai, turintys aukštą cholesterolio kiekį, rezultatai parodė, kad greitai, nuo dozės priklausomas ir ilgai sumažėjo apoB-100, MTL cholesterolio, labai mažo tankio lipoproteinų (VLDL) cholesterolio ir bendrojo cholesterolio kiekis. trigliceridų kiekį ir buvo saugus bei gerai toleruojamas. III fazės klinikiniai ISIS-301012 tyrimai su pacientais, sergančiais hipercholesterolemija, tęsiami. Mipomersenas buvo įvertintas keliuose 2 fazės tyrimuose su įvairiais pacientų fenotipais iš pradžių kaip monoterapija, po to deriniai su mažesnėmis statinų dozėmis, o paskui didelėmis statinų dozėmis ir kitais lipidų kiekį mažinančiais preparatais (Yoshitaka ir kt., 2008).

Restenozė: Restenozė pažodžiui reiškia stenozės pasikartojimą, kraujagyslių susiaurėjimą, dėl kurio sutrinka kraujotaka. Restenozė paprastai susijusi su arterija ar kita stambia kraujagysle, kuri susiaurėjo, buvo gydoma, kad pašalintų užsikimšimą ir vėliau vėl susiaurėtų (Dangas ir Kuepper, 2002). C-myc slopinimas taip pat trukdytų tolesnių genų, tokių kaip susiję su ląstelių sukibimu, ląstelių ciklu ir jungiamojo audinio matricos pertvarkymu, ekspresijai (De Marisa ir kt., 2006). Konkrečiai dėl obstrukcinių kraujagyslių ligų vystymosi, c-Myc greitai sukeltas kraujagyslių lygiųjų raumenų ląstelėse (VSMC) po arterijų pažeidimo ir aktyvuojamas proliferaciniais signalais, įskaitant daugybę kraujagyslių endotelio ląstelių (EB) biologijos tarpininkų, tokių kaip MTL, trombino, endotelino ir angiotenzino II (Liang ir kt., 2007). Įrodyta, kad c-Myc slopinimas slopina lygiųjų raumenų ląstelių proliferaciją in vitro ir keliuose gyvūnų modeliuose. Neseniai pristatytas AVI-4126 priklauso molekulių šeimai, žinoma kaip fosforodiamidato morfolino oligomerai (PMO), kurių seka papildo c-myc mRNR transliacijos pradžios vietą. AVI-4126 veikimo mechanizmas apima trukdymą ribosominiam surinkimui, taip užkertant kelią c-myc transliacijai ir trukdymui c-myc pre-mRNR 1 introno 1-egzono splaisingui, užkertant kelią tinkamam c-myc mRNR vertimui (Hudziak ir kt., 2000). IC50, slopinantis c-myc AVI-4126, yra 0,3 ir#956M ląstelių kultūroje. Ląstelių atsakas į AVI-4126 yra sumažėjęs ląstelių augimas, susijęs su ląstelių sustojimu ląstelių ciklo G0/G1 fazėje (Stephens, 2004 Kipshidze ir kt., 2005). c-Myc amplifikacija ir per didelė ekspresija taip pat buvo koreliuojama su progresavimu ir atsparumu chemoterapijai sergant plaučių vėžiu. Nustatyta, kad AVI-4126, neutralus antisensinis fosforodiamidatas morfolino oligomeras (PMO), kuris konkrečiai slopina c-MYC ekspresiją daugelyje ligų modelių, ir I fazės klinikiniuose tyrimuose nustatyta, kad yra saugus ir biologiškai prieinamas esant kietiems navikams (Sekhon ir kt., 2008) .

NEUROLOGINIŲ LIGŲ NAUDOJAMI REAGENTAI

Išsėtinė sklerozė: Išsėtinė sklerozė (MS), taip pat žinoma kaip išplitusi sklerozė arba išplitęs encefalomielitas, yra autoimuninė būklė, kai imuninė sistema puola centrinę nervų sistemą (CNS) ir sukelia demielinizaciją. Tai gali sukelti daugybę fizinių ir psichinių simptomų ir dažnai pereina į fizinę ir pažinimo negalią (Sospedra ir Martin, 2005 Taragh ir Ilali, 2010). Prekybos T ląstelėmis antagonizmas buvo ištirtas kaip terapinis požiūris į MS, naudojant antikūnų ir antisense technologijas (Sorbera ir kt., 2005). Klinikiniai įrodymai apie labai vėlyvo antigeno-4 (VLA-4) (⓮ γ-integrino) pagrindinį vaidmenį limfocitų transmigracijoje į CNS neseniai buvo patvirtinti, remiantis humanizuoto mAb veiksmingumu ⓮ integrinui, natalizumabą (Antegren, Tysabri, Elan Pharmaceuticals ir Biogen/Idec) pacientams, sergantiems recidyvuojančia IS. Ilgalaikis natalizumabo vartojimas davė didelės naudos klinikinių tyrimų metu, įskaitant pastebimą naujų pažeidimų rizikos sumažėjimą ir reikšmingą paūmėjimų rizikos sumažėjimą per 2 mėnesius nuo gydymo pradžios (Comi, 2009). 2005 m. Pradžioje „Biogen Idec“ ir „Elan Corporation“ savanoriškai sustabdė „Tysabri“ prekybą JAV, remdamiesi dviem praneštais apie progresuojančios daugiažidininės leukoencefalopatijos (PML) atvejus (Aksamit, 2006 Linda ir kt., 2009). VLA-4 yra α 4 β 1 integrinas, lokalizuotas daugelyje uždegiminių ląstelių, dalyvaujantis ląstelių adhezijoje, prekiaujant ir aktyvuojant, jungiantis prie VCAM-1 ir fibronektino. Antrosios kartos antisense VLA-4 inhibitorius (ATL1102, Antisense Therapeutics Limited) šiuo metu tiriamas kaip poodinis gydymas, kai atsiranda recidyvuojanti-remituojanti IS. ATL1102 farmakokinetika ir saugumas buvo tiriamas dvigubai aklu, placebu kontroliuojamu tyrimu su sveikais asmenimis. Šis produktas skirtas slopinti CD49d (alfa integrino), VLA-4 integrino komplekso subvieneto, kuris laikomas atsakingu už MS progresavimą, ekspresiją (Lofthouse ir kt., 2005 Tilley, 2008).

Myasthenbia gravis (MG) yra lėtinė ir sekinanti liga, kuria serga apie 100 000 žmonių visame pasaulyje, kuriai būdingas raumenų silpnumas, ypač nesugebėjimas atmerkti akių, rankų ir kojų raumenų problemos. Kūno imuninė sistema atakuoja acetilcholino receptorius neuromuskulinėje jungtyje (NMJ), trukdydama normaliai raumenų funkcijai (Conti-Fine ir kt., 2006). Sunkiais atvejais liga gali apimti kvėpavimo raumenis ir sukelti gyvybei pavojingą kvėpavimo nepakankamumą. Dabartinis MG valdymas apima anticholinesterazės preparatų naudojimą laikinam nervų ir raumenų perdavimo pagerinimui, anti-acetilcholino receptorių (AChR) antikūnų (Abs) pašalinimą naudojant plazmos mainus arba specialias imuninės absorbcijos procedūras, nespecifinių imunosupresantų ar imunomoduliatorių naudojimą, siekiant sustabdyti AChR atsakas ir timektomija (Keesey, 2004 Rasool ir kt., 2008). Naujas požiūris į ilgalaikį terapinį AChE aktyvumo slopinimą MG sergantiems pacientams yra pagrįstas pastebėjimu, kad tiek MG sergančių pacientų, tiek eksperimentinių autoimuninių MG (EAMG) gyvūnų NMJ yra sustiprinta AchE pre-mRNR transkripcija ir pakitęs sujungimas, sukaupus paprastai retą AchE-R variantą (Brenner ir kt., 2003). Dažniausiai pasitaikantis sinapsinis AChE-S variantas sudaro membraninius multimerus. Priešingai, AChE-R egzistuoja kaip tirpūs monomerai, kuriems trūksta karboksterminalinio cisteino, reikalingo membranai pritvirtinti. Taigi, AChE-R prasiskverbia į sinaptinę erdvę ir suskaido ACh, kol ji nepasiekia postsinapsinės membranos, taip sukeldama pavojų AChR aktyvavimui. Šie pastebėjimai paskatino sukurti ir naudoti EN101 (Monarsen), sintetinį 20 bazių antisense oligonukleotidą, kuris slopina AChE-R ekspresiją. EN101 normalizuoja neuromuskulinį perdavimą eksperimentinėje autoimuninėje MG (EAMG), moduliuojant AChE variantų sintezę, taip veikiant ACh hidrolizės greitį ir AchR aktyvacijos efektyvumą (Argov ir kt., 2007 Sussman ir kt., 2008). JAV maisto ir vaistų administracija Monarsen suteikė retųjų vaistų paskyrimo statusą. EN101 bandymai atliekami su žmonėmis. Jis yra modifikuotas, kad būtų užtikrintas stabilumas vartojant per burną. Monarsenas dabar tiriamas II fazės tyrime (Katzberg ir Bril, 2009).

Cukrinis diabetas apibrėžia medžiagų apykaitos sutrikimų grupę, kuriai būdinga hiperglikemija, atsirandanti dėl insulino sekrecijos, insulino veikimo ar abiejų sutrikimų. Tai vienas iš labiausiai paplitusių medžiagų apykaitos sindromas s, kadangi pasaulyje yra 200 milijonų diabetu sergančių asmenų, tai sukuria poreikį suprasti ligos etiologiją ir veiksnius, turinčius įtakos jos atsiradimui (Malecki ir Klupa, 2005 Al-Zubairi ir Eid 2010). Daugelis mokslininkų ir kompanijų užsiima gerinimu biologinis prieinamumas insulino natūraliu fiziologiniu būdu (Singh ir kt., 2011).Molekulinės biologijos metodas, pagrįstas baltymų tirozino fosfataze (PTP) -1B, prieštaraujančiu insulino signalizacijai, yra potencialus terapinis atsparumo insulinui, susijusio su nutukimu ir 2 tipo cukriniu diabetu, taikinys. Iki šiol PTP-1B tyrimus ribojo specifinių antagonistų prieinamumas, tačiau graužikų gydymas antisense oligonukleotidais (ASO), nukreiptas prieš PTP-1B, pagerina jautrumą insulinui, slopina lipogeninį poveikį. genų ekspresija ir sumažina trigliceridų kaupimąsi kepenyse ir riebaliniame audinyje. ISIS 113715 yra 20 merų fosforotioato antisense oligonukleotidas (ASO), papildantis baltymo tirozino fosfatazės 1B (PTP-1B) pasiuntinio RNR ir vėliau mažinantis PTP-1B baltymo, neigiamo insulino receptoriaus reguliatoriaus (Montalibet ir Kennedy,), transliaciją. , 2005 Geary ir kt., 2006). ISIS 113715 šiuo metu tiriamas ankstyvųjų II fazės klinikinių tyrimų metu, siekiant nustatyti jo gebėjimą pagerinti ar atkurti jautrumą insulinui 2 tipo cukriniu diabetu sergantiems pacientams. Ateityje bus tiriamas ISIS 113715 derinys su antidiabetiniais junginiais (Swarbrick ir kt., 2009).

Vaistai, pagrįsti antisense, yra potencialiai vertingi naujų vaistų gydymo būdai. Antisense pagrįsti junginiai gali būti naudingi kruopščiai atrinktiems tikslams ir sąlygoms, tokioms kaip išsėtinė sklerozė, psoriazė, plaučių vėžys, kolorektalinė karcinoma, kasos karcinoma, piktybinė glioma ir piktybinė melanoma, diabetas ir tokios ligos kaip astma ir artritas su uždegiminiu komponentu . Galimybė naudoti antisense junginius, siekiant slopinti baltymų, jau žinomų kaip vaistų taikiniai, ekspresiją, yra vertinga strategija ir turėtų padidinti kliniškai naudingų junginių atsiradimo tikimybę. Sparti antisense technologijos plėtra suteikia beveik neribotas galimybes kurti naujas ir labai specifines terapijas.

2: Aboul-Fadl, T., 2005. Sense oligonukleotidai: naujausia technika. Curr. Med. Chem., 12: 2193-2214.

3: Abramova, T. V., M. F. Kassakinas ir V. N. Silnikov, 2009. Nauji oligonukleotidų analogai, pagrįsti morfolino nukleozidų subvienetais. Ind. J. Chem., 48: 1721-1726.
Tiesioginė nuoroda |

4: Adcockas, I. M., G. Caramori ir K. F. Chung, 2008. Nauji astmos gydymo vaistai. Lancet, 372: 1073-1087.
CrossRef |

5: Adjei, A. A., G. K. Dy, C. Erlichmanas, J. M. Reidas ir J. A. Sloanas et al., 2003. I fazės ISIS 2503, antisense H-ras inhibitoriaus, derinys su gemcitabinu, tyrimas pacientams, sergantiems pažengusiu vėžiu. Clin. Cancer Res., 9: 115-123.
PubMed |

6: Fatima, A., E.S. Stroesas ir J.J. Kastelein, 2007. Antisense apolipoprotein B terapija: Kur mes esame? Curr. Nuomonė. Lipidol., 18: 397-400.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

7: Aksamit, A. J., 2006. Progresuojančios daugiažidininės leukoencefalopatijos ir natalizumabo apžvalga. Neurologas, 12: 293-298.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

8: Al-Zubairi, A.S. ir E.E.M. Eid, 2010. Molekuliniai tikslai kuriant vaistus nuo diabeto. Int. J. Pharmacol., 6: 784-795.
CrossRef | Tiesioginė nuoroda |

9: Alberts, S. R., M. Schroeder, C. Erlichman, P. D. Steenas ir N. R. Foster ir kt., 2004. Gemcitabinas ir ISIS-2503 pacientams, sergantiems lokaliai išplitusia ar metastazavusia kasos adenokarcinoma: šiaurės centrinio vėžio gydymo II fazės tyrimas. J. Clin. Oncol., 22: 4944-4951.
CrossRef |

10: Amantana, A. ir P. L. Iversen, 2005. Fosforodiamidato morfolino antisense oligomerų farmakokinetika ir biologinis pasiskirstymas. Curr. Nuomonė. Pharmacol., 5: 550-555.
CrossRef | PubMed |

11: Amato, R. J., 2007. DNR metilinimo slopinimas antisense oligonukleotidu MG98 kaip vėžio terapija. Clin. Urogenitalinis vėžys, 5: 422-426.
CrossRef |

12: Ambrosini, G., C. Adida ir DC Altieri, 1997. Naujas anti-apoptozės genas survivinas, išreikštas vėžiu ir limfoma. Nat. Med., 3: 917-921.
CrossRef |

13: Andrei, G., E. De Clercq ir R. Snoeck, 2009. Narkotikų taikiniai sergant citomegalovirusine infekcija. Užkrėsti. Nesutarimai. Narkotikų taikiniai, 9: 201-222.
Tiesioginė nuoroda |

14: Argov, Z., D. McKee, S. Agus, S. Brawer ir N. Shlomowitz ir kt., 2007. Žmogaus miastenijos gydymas su geriamuoju antisensiniu acetilcholinesterazės slopinimu. Neurologija, 69: 699-700.
CrossRef | PubMed | Tiesioginė nuoroda |

15: Askari, F.K. ir W.M. McDonnell, 1996. Antisense-oligonukleotidų terapija. N. Engl. J. Med., 334: 316-318.
Tiesioginė nuoroda |

16: Athyros, V. G., A. I. Kakafika, K. Tziomalos, A. Karagiannis ir D.P. Mikhailidis, 2008. Antisense technologija širdies ir kraujagyslių ligų profilaktikai ar gydymui: Kitas sėkmingas? Eksperto nuomonė. Ištirti. Narkotikai, 17: 969-972.
CrossRef |

17: Azad, R.F., V.B. Vairuotojas K. Tanaka, R. M. Crooke ir K.P. Anderson, 1993. Fosforotioato oligonukleotido, papildančio žmogaus citomegaloviruso pagrindinio tiesioginio ir ankstyvojo regiono RNR, antivirusinis aktyvumas. Antimikrobinis. Agents Chemother., 37: 1945-1954.
Tiesioginė nuoroda |

18: Ball, H. A., M. R. Van Scott ir C. B. Robinson, 2004. Sense and antisense: Oligonukleotidų ir interferencinės RNR terapinis potencialas sergant astma ir alerginiais sutrikimais. Clin. Rev. Allergy Immunol., 27: 207-217.
CrossRef |

19: Detrickas, B., C. N. Nagineni, L. R. Grillone, K.P. Andersonas, S.P. Henry ir J.J. Hooks, 2001. Žmogaus citomegaloviruso replikacijos slopinimas žmogaus tinklainės epitelio ląstelių modelyje antisense oligonukleotidais. Investuoti Oftalmolis. Visual Sci., 42: 163-169.
Tiesioginė nuoroda |

20: Barish, C. F., 2005. Alicaforsen terapija sergant uždegimine žarnyno liga. Eksperto nuomonė. Biol. Terapija, 5: 1387-1391.
CrossRef |

21: Baumgart, D.C. ir W.J. Sandbornas, 2007. Uždegiminė žarnyno liga: klinikiniai aspektai ir nusistovėjusi bei besivystanti terapija. Lancet, 369: 1641-1657.
CrossRef | PubMed | Tiesioginė nuoroda |

22: Bennett, C.F. ir E. E. Swayze, 2009. RNR, nukreipta į terapiją: antisense oligonukleotidų kaip terapinės platformos molekuliniai mechanizmai. Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol., 50: 259-293.
CrossRef |

23: Bernsteinas, E., A. A. Caudy, S.M. Hammondas ir G.J. Hannon, 2001. Bidentinės ribonukleazės vaidmuo inicijuojant RNR trukdžius. Gamta, 409: 363-366.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

24: Bertino, J. R., 2009. Vėžio tyrimai: nuo folatų antagonizmo iki molekulinių taikinių. Geriausia praktika. Res. Clin. Hematol., 22: 577-582.
CrossRef |

25: Bevilacqua, P.C. ir R. Yajima, 2006. Nukleobazių katalizė ribozimo mechanizme. Curr. Nuomonė. Chem. Biol., 10: 455-464.
CrossRef |

26: Bonafoux, D. ir W.C. Lee, 2009. TGF-beta moduliacijos strategijos: naujausių patentų apžvalga. Eksperto nuomonė. Ther. Pat., 19: 1759-1769.
CrossRef |

27: De Bouvere, B., L. Kerreinans, C. Hendrix, H. de Winter, G. Schepers, A. van Aerschot ir P. Herdewijn, 1997. Hexitol Nucleic Acids (HNA): sintezė ir savybės. Nukleozidai Nukleotidai Nukleino rūgštys, 16: 973-976.
CrossRef |

28: Brenner, T., Y. Hamra-Amitay, T. Evron, N. Boneva, S. Seidman ir H. Soreq, 2003. Acetilcholinesterazės perskaitymo vaidmuo myasthenia gravis patofiziologijoje. FASEB J., 17: 214-222.
CrossRef | PubMed | Tiesioginė nuoroda |

29: Calvez, H. L., M. Yu ir F. Fang, 2004. Biocheminė virusinių infekcijų prevencija ir gydymas. Nauja infekcinių ligų medicinos paradigma. Virol. J., 1: 12-12.
CrossRef |

30: Campbellas, J. M., T. A. Bacon ir E. Wickstrom, 1990. Oligodeoksinukleozido fosforotioato stabilumas tarpląsteliniuose ekstraktuose, auginimo terpėje, serume ir smegenų skystyje. J. Biochem. Biofizai. Methods, 20: 259-267.
PubMed |

31: Cech, T. R., A. J. Zaug ir P.J. Grabowski, 1981 m. In vitro Tetrahymena ribosominės RNR pirmtako sujungimas: guanozino nukleotido įtraukimas į tarpinės sekos pašalinimą. Cell, 27: 487-496.
CrossRef | PubMed |

32: Cerqueira, N.M.F.S.A., P.A. Fernandes ir M. Ramos, 2007. Ribonukleotidų reduktazė: kritinis fermentas vėžio chemoterapijai ir antivirusiniams vaistams. Naujausi patentai prieš vėžį, narkotikų atradimas, 2: 11-29.
Tiesioginė nuoroda |

33: Chan, J.H.P., S. Lim ir W.S.F. Wong, 2006. Antisense oligonukleotidai: nuo dizaino iki gydymo. Clin. Galioj. Pharmacol. Physiol., 33: 533-540.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

34: Chanan-Khan, A.A., R.Niesvizky, R.J. Hohlas, T. M. Zimmermanas ir N.P. Christiansen ir kt., 2004. Atsitiktinių imčių daugiacentris 3 fazės tyrimas su didelėmis deksametazono dozėmis (dex) su natrio oblimersenu arba be jo (G3139 Bcl-2 antisense genasense) pacientams, sergantiems pažengusia išsėtine mieloma (MM). Kraujo pelenai Ann. Meeting Abstracts, 104: 1477-1477.
Tiesioginė nuoroda |

35: Chapmanas, M. J. ir M. Caslake, 2004. Ne didelio tankio lipoproteinų cholesterolis kaip rizikos veiksnys: rizikos, susijusios su apolipoproteino B turinčiais lipoproteinais, sprendimas. Euras. Širdis J. Suppl., 6: A43-A48.
CrossRef |

36: Chen, X., N. Dudgeon, L. Shen ir J.H. Wang, 2005. Cheminis genų slopinimo oligonukleotidų modifikavimas vaistų atradimui ir kūrimui. Vaistas Discovas. Šiandien, 10: 587-593.
CrossRef |

37: Chi, K. N., A. Zoubeidi ir M. E. Gleave, 2008. „Custirsen“ (OGX-011): antrosios kartos antisense klasterino inhibitorius vėžiui gydyti. Eksperto nuomonė. Ištirti. Narkotikai, 17: 1955-1962.
CrossRef |

38: Chi, K.N., L.L.Siu, H.Hirte, S.J. Hotte ir J. Knox ir kt., 2008. I fazės tyrimas su OGX-011, 2'-metoksietilfosforotioato antisense prieš klasteriną, kartu su docetakseliu pacientams, sergantiems pažengusiu vėžiu. Clin. Cancer Res., 14: 833-839.
CrossRef |

39: Cho-Chung, Y. S., 1999. Antisense oligonukleotidų serino/treonino kinazių slopinimas: novatoriškas požiūris į vėžio gydymą. Pharmacol. Ther., 82: 437-449.
CrossRef |

40: Comi, G., 2009. Išsėtinės sklerozės gydymas: natalizumabo vaidmuo. Neurol. Mokslas, 30: 155-158.
CrossRef |

41: Conti-Fine, B. M., M. Milani ir H. J. Kaminski, 2006. Myasthenia gravis: praeitis, dabartis ir ateitis. J. Clin. Invest., 116: 2843-2854.
CrossRef |

42: Cripps, C.M., A.T. Figueredo, A.M. Oza, M. J. Taylor ir A. L. Fields ir kt., 2002. II fazės atsitiktinių imčių ISIS 3521 ir ISIS 5132 tyrimas pacientams, sergantiems lokaliai išplitusiu ar metastaziniu kolorektaliniu vėžiu: Kanados klinikinių tyrimų grupės tyrimo nacionalinis vėžio institutas. Clin. Cancer Res., 8: 2188-2192.
Tiesioginė nuoroda |

43: Crooke, S.T., 1998. Antisense vaistų molekuliniai mechanizmai: RNase H. antisense ir nukleorūgštis. Drug Dev., 8: 133-134.
CrossRef | Tiesioginė nuoroda |

44: Cummingsas, J., T.H. Ward, E. Lacasse, C. Lefebvre ir M. St-Jean ir kt., 2005. Farmakodinaminių tyrimų patvirtinimas, siekiant įvertinti antisense junginio (AEG 35156), skirto X-susieto apoptozės baltymo XIAP inhibitoriui, klinikinį veiksmingumą. Br. J. Vėžys, 92: 532-538.
CrossRef |

45: Cunningham, C.C., J.T. Holmlundas, R.S. Geary, T.J. Kwoh ir A. Dorr ir kt., 2001. I fazės H-ras antisense oligonukleotido ISIS 2503 tyrimas, skiriamas kaip nuolatinė infuzija į veną pacientams, sergantiems pažengusia karcinoma. Vėžys, 92: 1265-1271.
CrossRef |

46: D'Alonzo, D., A. Van Aerschot, A. Guaragna, G. Palumbo ir G. Schepers ir kt., 2009. 1 ', 5'-anhidro-L-heksitolio nukleorūgščių (L -HNA). Chem. - Eur. J., 15: 10121-10131.
CrossRef |

47: Damm-Welk, C., U. Fuchs, W. Wossmann ir A. Borkhardt, 2003. Taikymas į onkogeninius suliejimo genus leukemijose ir limfomose RNR interferencijos būdu. Semin Cancer Biol., 13: 283-292.
CrossRef |

48: Dangas, G. ir F. Kuepper, 2002. Restenozė: pakartotinis vainikinių arterijų susiaurėjimas ir profilaktika. Tiražas, 105: 2586-2586.
Tiesioginė nuoroda |

49: Davisas, A. J., K. A. Gelmonas, L. L. Siu, M. J. Moore ir C. D. Britten ir kt., 2003. Žmogaus DNR metiltransferazės antisense oligodeoksinukleotido MG98 I fazė ir farmakologinis tyrimas, skiriamas 21 dienos nepertraukiamos infuzijos būdu kas 4 savaites. Investuoti Nauji vaistai, 21: 85-97.
CrossRef |

50: De Boer, W.I., V.K.T. Alagappanas ir H.S. Sharma, 2007. Lėtinės obstrukcinės plaučių ligos molekuliniai mechanizmai Galimi gydymo tikslai. Ląstelių biochem. Biophys., 47: 131-147.
Tiesioginė nuoroda |

51: Declercq, R., A. van Aerschot, J. R. Read, P. Herdewijn ir L. van Meervelt, 2002. Dvigubų spiralinių heksitolio nukleorūgščių kristalinė struktūra. J. Am. Chem. Soc., 124: 928-933.
PubMed |

52: Dector, M. A., P. Romero, S. Lopez ir C. F. Arias, 2002. Rotaviruso geno nutildymas mažomis trukdančiomis RNR. EMBO Rep., 3: 1175-1180.
CrossRef |

53: Desai, A. A., R. L. Schilsky, A. Young, L. Janisch ir W. M. Stadler ir kt., 2005. I fazės antisense oligonukleotido GTI-2040 tyrimas, skiriant nepertraukiamą intraveninę infuziją pacientams, sergantiems pažengusiais solidiniais navikais. Ann. Oncol., 16: 958-965.
PubMed |

54: Doudna, J.A. ir J. R. Lorsch, 2005. Ribozimo katalizė: nesiskiria, tik dar blogiau. Nat. Struktūrinis Mol. Biol., 12: 395-402.
CrossRef |

55: Downward, J., 2004. Mokslas, medicina ir būsimas RNR kišimasis. BMJ, 328: 1245-1248.
CrossRef |

56: Dritschilo, A., C.H. Huang, C.M. Rudin, J. Marshall ir B. Collins ir kt., 2006. I fazės liposomomis kapsuliuotos c-raf antisense oligodeoksiribonukleotido infuzijos kartu su spinduline terapija tyrimas, sergantiems pažengusiais piktybiniais navikais. Clin. Cancer Res., 12: 1251-1259.
PubMed |

57: Dryselius, R., S.K. Aswasti, G.K. Rajarao, P.E. Nielsen ir L. Good, 2003. Vertimo pradžios kodono sritis yra jautri antisense PNA slopinimui Escherichia coli. Oligonukleotidai, 13: 427-433.
PubMed |

58: Duan, W., J.H.P. Chan, K. McKay, J. R. Crosby ir H. H. Choo ir kt., 2005. Įkvėptas p38 ir#945 mitogeno aktyvuotas baltymų kinazės antisense oligonukleotidas silpnina astmos peles. Esu. J. Respir. Crit. Care Med., 171: 571-578.
Tiesioginė nuoroda |

59: Elayadi, A. N. ir D. R. Corey, 2001. PNA ir LNA oligomerų taikymas chemoterapijai. Curr. Nuomonė. Ištirti. Narkotikai, 2: 558-561.
Tiesioginė nuoroda |

60: Elsayed, Y.A. ir E.A. Sausville, 2001. Pasirinktas naujas priešvėžinis gydymas, skirtas ląstelių signaliniams baltymams. Onkologas, 6: 517-535.
Tiesioginė nuoroda |

61: Fan, H., C. Villegas, A. Huang ir J.A. Wright, 1998. Žinduolių ribonukleotido reduktazės R2 komponentas ląstelių transformacijos mechanizmuose bendradarbiauja su įvairiais onkogenais. Cancer Res., 58: 1650-1653.
Tiesioginė nuoroda |

62: Fiodoras, M. J. ir E. Westhofas, 2002. Ribozimai: pirmieji 20 metų. Mol. Cell., 10: 703-704.
CrossRef |

63: Fichou, Y. ir C. Ferec, 2006. Oligonukleotidų potencialas terapiniam naudojimui. Trends Biotechnol., 24: 563-570.
CrossRef |

64: Fidias, P., N.A. Pennell, A.L. Boral, G.I. Shapiro ir A. T. Skarin ir kt., 2009. C-raf-1 antisense oligonukleotido ISIS 5132 kartu su karboplatina ir paklitakseliu I fazės tyrimas pacientams, sergantiems anksčiau negydytu, išplitusiu nesmulkialąsteliniu plaučių vėžiu. J. Thorac. Oncol., 4: 1156-1162.
CrossRef | Tiesioginė nuoroda |

65: Ugnis, A., S. Xu, M.K. Montgomery, S.A. Kostas, S.E. Vairuotojas ir C.C. Mello, 1998. Stiprus ir specifinis genetinis dviejų grandinių RNR trukdymas Caenorhabditis elegans. Gamta, 391: 806-811.
CrossRef | PubMed | Tiesioginė nuoroda |

66: Flandrija, K.C. ir J. K. Burmesteris, 2003. Augimo faktoriaus transformavimo medicininis pritaikymas-β. Clin. Med. Res., 1: 13-20.
Tiesioginė nuoroda |

67: Flynn, A., R. W. Berg, T. Wong, M. van Aken, M. D. Vincent, M. Fukushima ir J. Koropatnick, 2006. Terapinis antisense oligodeoksinukleotidų potencialas sumažinti timidilato sintazę mezoteliomoje. Mol. Cancer Ther., 5: 1423-1433.
CrossRef | PubMed |

68: Galderisi, U., A. Cascino ir A. Giordano, 1999. Antisense oligonukleotidai kaip terapiniai agentai. J. Ląstelė. Physiol., 181: 251-257.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

69: Isidoro-Garcia, M., I. Davila, E. Laffond, E. Moreno, F. Lorente ir R. Gonzalez-Sarmiento, 2005. Interleukino-4 (IL4) ir interleukino-4 receptorių (IL4RA) polimorfizmas astmos metu : Atvejo kontrolės tyrimas. Clin. Mol. Alergija, 3: 15-15.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

70: Gauvreau, G. M., L. P. Boulet, D.W. Cockcroft, A. Baatjes ir J. Cote ir kt., 2008. Antisense terapija prieš CCR3 ir bendrą beta grandinę silpnina alergenų sukeltas eozinofilines reakcijas. Esu. J. Kvėpavimo kritikas. Care Med., 177: 952-958.
CrossRef |

71: Ge, Q., M.T. McManus, T. Nguyen, C.H. Shen, P.A. Sharp, H. N. Eisen ir J. Chen, 2003. Gripo viruso gamybos RNR trukdžiai, tiesiogiai nukreipiant mRNR į skilimą ir netiesiogiai slopinant visą viruso RNR transkripciją. Proc. Natl. Akad. Sci., 100: 2718-2723.
PubMed |

72: Geary, R. S., J. D. Bradley, T. Watanabe, Y. Kwon, M. Wedel, J.J. van Lier ir A.A. VanVliet, 2006. Trūksta farmakokinetinės sąveikos ISIS 113715, 2-0-metoksietile modifikuoto antisense oligonukleotido, nukreipto į baltymų tirozino fosfatazės 1B pasiuntinio RNR, su geriamaisiais antidiabetiniais junginiais metforminu, glipizidu arba roziglitazonu. Clin. Pharmacokinet., 45: 789-801.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

73: Gewirtz, A. M., 2000. Oligonukleotidų terapija: žingsnis į priekį. J. Clin. Oncol., 18: 1809-1811.
Tiesioginė nuoroda |

74: Gjertsen, B.T., T. Bredholt, N. Anensen ir O.K. Vintermyr, 2007. Bcl-2 Antisense gydant žmonių piktybinius navikus: tikslinės terapijos kliedesiai. Curr. Pharm. Biotechnol., 8: 373-381.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

75: Gordonas, S.C., B.R. Bacon ir I. M. Jacobson, 2002. II fazės, 12 savaičių ISIS 14803, antisensinio HCV inhibitoriaus, skirtas lėtiniam hepatitui C gydyti, tyrimas. Hepatologija, 36: 362-362.

76: Gore, S.D., 2009 m. In vitro gydymo hipometilinimo agentais ir histono dezacetilazės inhibitoriais pagrindas: ar gydymui stebėti gali būti naudojami epigenetiniai pokyčiai? Leuk. Res., 33: S2-S6.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

77: Gross, A., J.M. Mc Donnell ir S.J. Korsmeyer, 1999. Bcl-2 šeimos nariai ir mitochondrijos apoptozėje. Genes Dev., 13: 1899-1911.
Tiesioginė nuoroda |

78: Guanghui, H. ir P. Agarwal, 2009. Žmogaus ligos ir vaistų tinklas, pagrįstas genomo išraiškos profiliais Plosone, 4: e6536-e6536.
Tiesioginė nuoroda |

79: Haasnoot, J. ir B. Berkhout, 2009. Nukleino rūgštimis pagrįsti vaistai kovoje su patogeniniais virusais. Handb. Galioj. Pharmacol., 189: 243-263.
CrossRef | PubMed |

80: Salė, A.H.S. ir K. A. Aleksandras, 2003 m.18 tipo E6 ir E7 tipo žmogaus papilomos viruso RNR interferencija sukelia Hela ląstelių senėjimą. J. Virol., 77: 6066-6069.
CrossRef |

81: Hamasaki, K., K. Nakao, K. Matsumoto, T. Ichikawa, H. Ishikawa ir K. Eguchi, 2003. Trumpas trukdantis RNR nukreiptas hepatito B viruso replikacijos slopinimas. FEBS Lett., 543: 51-54.
Tiesioginė nuoroda |

82: Hammond, S., 2005. Pjaustymas ir pjaustymas: pagrindinė RNR trukdžių kelio mašina. FEBS Lett., 579: 5822-5829.
Tiesioginė nuoroda |

83: Hau, P., P. Jachimczak ir U. Bogdahn, 2009. Piktybinių gliomų gydymas TGF-beta2 antisense oligonukleotidais. Expert Rev. Anticancer Ther., 9: 1663-1674.
PubMed |

84: Hau, P., P. Jachimczak, R. Schlingensiepen, F. Schulmeyer ir T. Jauch ir kt., 2007. TGF-beta2 slopinimas su AP 12009 pasikartojančiose piktybinėse gliomose: nuo ikiklinikinių iki I/II fazės tyrimų. Oligonukleotidai, 17: 201-212.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

85: Hendrix, C., H. Rosemeyer, B. De Bouvere, A. van Aerschot, F. Seela ir P. Herdewijn, 1997 m. ŽIV atvirkštinė transkriptazė. Chem. - Eur. J., 3: 1513-1520.
CrossRef |

86: Henris, S. P., R. C. Mineris, W.L. Drew, J. Fitchett, C.Y. Defalco, L. M. Rapp ir A. A. Levin, 2001. Antisense oligonukleotidų, skirtų slopinti CMV replikaciją, antivirusinis aktyvumas ir akių kinetika. Investuoti Oftalmolis. Visual Sci., 42: 2646-2651.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

87: Hoffmanas, V. F. ir D.J. Skiest, 2000. Citomegalovirusinio retinito terapiniai pokyčiai. Eksperto nuomonė. Investuoti Narkotikai, 9: 207-220.
CrossRef | PubMed |

88: Holmlund, J.T., 2003. Antisense technologijos taikymas: Affinitak ir kiti antisense oligonukleotidai klinikinėje raidoje. Ann. N. Y. akad. Sci., 1002: 244-251.
CrossRef | PubMed |

89: Hu, Y.P., G. Cherton-Horvat, V. Dragowska, S. Baird ir R.G. Korneluk ir kt., 2003. Antisense oligonukleotidai, nukreipti į XIAP, sukelia apoptozę ir sustiprina chemoterapinį aktyvumą prieš žmogaus plaučių vėžio ląsteles. in vitro ir in vivo. Clin. Cancer Res., 9: 2826-2836.
Tiesioginė nuoroda |

90: Hubbardas, A.K. ir R. Rothlein, 2000. Ląstelių adhezijos molekulės-1 (ICAM-1) ekspresija ir ląstelių signalizacijos kaskados. Laisvas radikas. Biol. Med., 28: 1379-1386.
CrossRef | PubMed |

91: Hudziak, R. M., J. Summertonas, D. D. Welleris ir P.L. Iversen, 2000. Sterinių blokuojančių fosforodiamidato antiproliferacinis poveikis Morpholino antisense agentai, nukreipti prieš c-myc. Antisense Nucleic Acid Drug Dev., 10: 163-176.
CrossRef | PubMed | Tiesioginė nuoroda |

92: Humbert, M., S. Holgate, L. P. Boulet ir J. Bousquet, 2007. Astmos kontrolė ar sunkumas: tai klausimas. Alergija, 62: 95-101.
CrossRef | PubMed |

93: Hyrup, B. ir P.E. Nielson, 1996. Peptidinės nukleorūgštys (PNA): sintezė, savybės ir galimas panaudojimas. Bioorg. Med. Chem., 4: 5-23.
CrossRef | PubMed |

94: Ibrahim, M.A., 2010. Genominės DNR metilinimo analizės pažanga. Biotechnology, 9: 459-468.
CrossRef | Tiesioginė nuoroda |

95: Issa, J. P. ir H. M. Kantarjian, 2009. Tikslinis DNR metilinimas. Clin. Cancer Res., 15: 3938-3946.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

96: Iversenas, P. L., K. M. Airdas, R. Wu, M. M. Morse ir G.R. Devi, 2009. Neutralių fosforodiamidato morfolino oligomerų įsisavinimas ląstelėse. Curr. Pharm. Biotechnol., 10: 579-588.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

97: Jacque, J. M., K. Triques ir M. Stevenson, 2002. ŽIV-1 replikacijos moduliavimas RNR interferencijos būdu. Gamta, 418: 435-438.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

98: O'Leary, J.G. ir G.L. Davis, 2010. Apžvalga: Hepatito C viruso replikacija ir galimi tiesioginio veikimo agentų taikiniai. Ther. Adv. Gastroenterol., 3: 43-53.
CrossRef |

99: Jansen, B., V. Wacheck, E. Heere-Ress, H. Schlagbauer-Wadl ir C. Hoeller ir kt., 2000. Piktybinės melanomos chemosensibilizacija gydant Bcl-2 antisense. Lancet, 356: 1728-1733.
Tiesioginė nuoroda |

100: Jasonas, T. L., R. Figueredo, P. J. Fergusonas, M. D. Vincentas, R. W. Bergas ir J. Koropatnickas, 2008. ODN 491, naujas antisense oligodeoksinukleotidas, nukreiptas į timidilato sintazę, daro specifinį poveikį ląstelėms žmogaus naviko ląstelių linijose. DNR ląstelė. Biol., 27: 229-240.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

101: Jia, Q. ir R. Sun, 2003. Gama herpeso viruso replikacijos slopinimas RNR interferencijos būdu. J. Virol., 77: 3301-3306.
CrossRef | PubMed |

102: Kamal, S.M., 2008. Ūminis hepatitas C: sisteminė apžvalga. Esu. J. Gastroenterol., 103: 1283-1297.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

103: Kangas, M.H. ir C.P. Reynolds, 2009. Bcl-2 inhibitoriai: nukreipimas į mitochondrijų apoptozinius kelius vėžio terapijoje. Clin. Cancer Res., 15: 1126-1129.
CrossRef | Tiesioginė nuoroda |

104: Kastelein, J., M. Trip ir M. Davidson, 2007. ISIS301012 inhetero-zigotinės šeiminės hipercholesterolemijos sauga ir aktyvumas. J. Clin. Lipidol., 1: 475-475.

105: Kasteleinas, J.J.P., M.K. Wedel, B. F. Baker, J. Su ir J. D. Bradley ir kt., 2006. Galingas apolipoproteino B ir mažo tankio lipoproteinų cholesterolio kiekio sumažėjimas, trumpai vartojant antisensinį apolipoproteino B inhibitorių. Tiražas, 114: 1729-1735.
CrossRef |

106: Katzberg, H.D. ir V. Bril, 2009. Dabartinė ir būsima imunoterapija sergant miastenija. Ateities neurol., 4: 745-759.
CrossRef |

107: Kaur, H., S. Saini, S. Peer ir J. Singh, 2010. Dabartinės terapijos ir nauji krūties vėžio gydymo tikslai. Syst. Rev. Pharmacy, 1: 40-49.
CrossRef | Tiesioginė nuoroda |

108: Keesey, J. C., 2004. Myasthenia gravis klinikinis įvertinimas ir valdymas. Raumenų nervas, 29: 484-505.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

109: Kennewell, P., 2003. Technologijų vertinimas: ISIS-104838, OraSense. Curr. Nuomonė. Mol. Ther., 5: 76-80.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

110: Khan, A.U., 2006. Ribozimas: klinikinė priemonė. Clin. Chim. Acta., 367: 20-27.
CrossRef | PubMed | Tiesioginė nuoroda |

111: Kipshidze, N., M. Tsapenko, P. Iversen ir D. Burger, 2005. Antisense terapija restenozei po perkutaninės koronarinės intervencijos. Eksperto nuomonė. Biol. Ther., 5: 79-89.
CrossRef | PubMed |

112: Knox, J.J., X.E. Chen, R. Feld, M. Nematollahi ir R. Cheiken ir kt., 2008. I-II fazės tyrimas su oblimerseno natrio druska (G3139, Genasense) kartu su doksorubicinu sergant pažengusia kepenų ląstelių karcinoma (NCI # 5798). Investuoti Nauji vaistai, 26: 193-194.
CrossRef |

113: Kolb, G., S. Reigadas, C. Boiziau, A. Van Aerschot ir A. Arzumanov ir kt., 2005. Heksitolio nukleorūgšties turintys aptameriai yra veiksmingi ŽIV-1 TAR RNR ligandai. Biochemija, 44: 2926-2933.
CrossRef |

114: Krause, B. R., 2004. Apolipoproteinų B ir E vaidmuo lipidų transportavime ir aterosklerozėje. Narkotikų kūrėjas Res., 6: 155-165.
CrossRef |

115: Kurreck, J., 2003. Antisense technologijos: tobulinimas naudojant naujas chemines modifikacijas. Euras. J. Biochem., 270: 1628-1644.
CrossRef |

116: Lacasse, E.C., G.G. Chertonas-Horvatas, K. E. Hewitt, L.J. Jerome ir S.J. Morris ir kt., 2006. Ikiklinikinis AEG35156/GEM 640, antros kartos antisense oligonukleotido, nukreipto į X susietą apoptozės inhibitorių, apibūdinimas. Clin. Cancer Res., 12: 5231-5241.
CrossRef |

117: Lacasse, E. C., E. R. Kandimalla, P. Winocour, T. Sullivan, S. Agrawal, J.W. Gillard ir J. Durkin, 2005. XIAP antisense taikymas vėžiui ir kitiems proliferaciniams sutrikimams: AEG35156/ GEM640 raida. Ann. N. Y. akad. Sci., 1058: 215-234.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

118: Leighl, N.B., S.A. Laurie, X.E. Chen, P. Ellis ir FA Shepherd ir kt., 2009. GTI-2040 ir docetakselio I/II fazės tyrimas, kaip antros eilės gydymas pažengusiam nesmulkialąsteliniam plaučių vėžiui (NSCLC): PMH II fazės tyrimas konsorciumas. J. Thorac. Oncol., 4: 1163-1169.
CrossRef | PubMed |

119: Leroith, D., H. Werner, D. Beitner-Johnson ir A. T. Jr. Roberts, 1995. Molekuliniai ir ląsteliniai insulino tipo augimo faktoriaus I receptorių aspektai. Endokr. Rev., 16: 143-163.
CrossRef |

120: Liang, C.Y., D.B. Zhou, X.G. Yu, B.N. Xu, W.B. Zhang ir S.B. Wang, 2007. C-myc mRNR ekspresija ankstyvoje restenozėje po miego arterijos endarterektomijos. Zhonghua Wai Ke Za Zhi, 45: 555-557.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

121: Lin, J., D. Ziring, S. Desai, S. Kim ir M. Wong ir kt., 2008. TNFalpha blokada sergant žmonių ligomis: veiksmingumo ir saugumo apžvalga. Clin. Immunol., 126: 13-30.
PubMed |

122: Linda, H., A. Von Heijne, O.E. Majoras, B.S. Caroline Ryschkewitsch, J. Berg, T. Olsson ir M.D. Claes Martin, 2009. Progresuojanti daugiažidininė leukoencefalopatija po monoterapijos natalizumabu. Naujoji Anglija, J. Med., 361: 1081-1087.
Tiesioginė nuoroda |

123: Lofthouse, S. A., J. R. Crosby, D. Tung, M. Guha, D. Kowalski, D. Luther ir C. C. Arberg, 2005. VLA-4 specifinių antisense oligonukleotidų aerozolinis tiekimas slopina pelių kvėpavimo takų uždegimą ir hiperreaktyvumą. Respirologija, 10: 11-11.

124: Benimetskaya, L., S. Mani ir C.A. Stein, 2005. Chemoterapijos ir antisensinio Bcl-2 oligonukleotido G3139 deriniai. Vėžio vaistų atradimo priemonė, 2005: 209-230.
CrossRef |

125: Luisas, P.A., J.Y. Douillard, P. Koralewski, C. Manegold ir EF Smit ir kt., 2006. III fazės gemcitabino ir cisplatinos tyrimas su arba be aprinokarseno-baltymo kinazės C-alfa antisense oligonukleotido arba be jo-pacientams, sergantiems pažengusios stadijos nesmulkialąstelėmis plaučių vėžys. J. Clin. Oncol., 24: 1428-1434.
PubMed |

126: Ma, Q., T. Yang, J. Yin, Z. Peng, M. Yu, Z. Liu ir F. Chen, 2009. Į insuliną panašaus augimo faktoriaus-1 (IGF-1) vaidmuo reguliuojant ląstelių ciklo progresavimą . Biochem. Biofizai. Res. Commun., 389: 150-155.
PubMed |

127: Mackay, H. J. ir C. J. Twelves, 2003. Baltymų kinazė C: priešvėžinių vaistų taikinys. Su endokrinine liga susijęs vėžys, 10: 389-396.
Tiesioginė nuoroda |

128: Maguire, B.A., 2009. Bakterijų ribosomų surinkimo slopinimas: tinkamas vaisto taikinys. Mikrobiolis. Mol. Biol. Rev., 73: 22-35.
CrossRef |

129: Mahato, R. I., K. Chengas ir R. V. Guntaka, 2005. Genų ekspresijos moduliavimas antisense ir antigeno oligodeoksinukleotidais bei maža trukdančia RNR. Eksperto nuomonė. Narkotikų pristatymas, 2: 3-28.
PubMed |

130: Maleckis, M.T. ir T. Klupa, 2005. 2 tipo cukrinis diabetas: nuo genų iki ligų. Pharmacol. Rep., 57: 20-32.
Tiesioginė nuoroda |

131: Malik, R. ir I. Roy, 2008. Antisense vaistų projektavimas ir kūrimas. Eksperto nuomonė. Narkotikų atradimas, 3: 1189-1207.
CrossRef |

132: Mansooras, M. ir A.J. Melendez, 2008. Antisense oligonukleotidinio vystymosi pažanga taikinio identifikavimui, patvirtinimui ir kaip naujas gydymas. Gene. Regul. Syst. Bio., 2: 275-295.
Tiesioginė nuoroda |

133: Matsukura, M., K. Shinozuka, G. Zon, H. Mitsuya, M. Reitz, J.S. Cohen ir S. Broder, 1987. Oligodeoksinukleotidų fosforotioato analogai: žmogaus imunodeficito viruso replikacijos ir citopatinio poveikio inhibitoriai. Proc. Natl. Akad. Sci., 84: 7706-7719.
Tiesioginė nuoroda |

134: Matthew, K.I., 2007. ISIS 301012 genų terapija hipercholesterolemijai gydyti: jausmas, antisense ar nesąmonė. Ann. Pharmacother., 41: 1669-1678.
CrossRef |

135: McCubrey, J. A., L. S. „Steelman“, S.L. Abramsas, W.H. Chappell ir S. Russo ir kt., 2009. Atsirandantys raf inhibitoriai. Eksperto nuomonė. Emerg. Narkotikai, 14: 633-648.
CrossRef |

136: McHutchison, J. G., K. Patel, P. Pockros, L. Nyberg ir S. Pianko ir kt., 2006. I fazės antisense hepatito C viruso inhibitoriaus (ISIS 14803) tyrimas, skiriamas lėtiniu hepatitu C sergantiems pacientams. J. Hepatol., 44: 88-96.
CrossRef |

137: Mita, A.C., M.M. Mita, S.T. Nawrocki ir F. J. Giles, 2008. Survivin: pagrindinis mitozės ir apoptozės reguliatorius ir naujas vėžio terapijos tikslas. Clin. Cancer Res., 14: 5000-5005.
CrossRef |

138: Mocarski, Jr. E.S., 1988. Citomegaloviruso biologija ir replikacija. Transfuzija. Med. Rev., 2: 229-234.
PubMed |

139: Monia, B. P., J. F. Johnstonas, T. Geigeris, M. Mulleris ir D. Fabbro, 1996. Priešvėžinis fosforotioato antisense oligodeoksinukleotido aktyvumas, nukreiptas prieš C-raf kinazę. Nat. Med., 2: 668-675.
CrossRef |

140: Monia, B. P., E. A. Lesnik, C. Gonzalez, W.F. Lima ir D. McGee ir kt., 1993. 2` modifikuotų oligonukleotidų, turinčių 2`-deoksi tarpų, įvertinimas kaip antisense genų ekspresijos inhibitoriai. J. Biol. Chem., 268: 14514-14522.
Tiesioginė nuoroda |

141: Montalibet, J. ir B.P. Kennedy, 2005. Terapinės PTP1B taikymo diabetui strategijos. Narkotikų atradimo šiandienos terapinės strategijos, 2: 129-135.
CrossRef |

142: O, C.K., G.P. Geba ir N. Molfino, 2010. Tyrimų terapijos, skirtos astmos gydymo IL-4/IL-13/STAT-6 keliui. Euras. Respir. Rev., 19: 46-54.
CrossRef | Tiesioginė nuoroda |

143: O'Shea, J. J., M. Averil ir P. Lipsky, 2002. Citokinai ir autoimunitetas. Nat. Rev. Immunol., 2: 37-45.
CrossRef |

144: Panas, W.H. ir G. A. Clawson, 2006. Antisense biologinės kontrolės programos. J. Ląstelė. Biochem., 98: 14-35.
CrossRef |

145: Pandey, V. N., A. Upadhyay ir B. Chaubey, 2009. Antisense Peptide Nucleic Acid (PNA) gydymo ŽIV perspektyvos. Eksperto nuomonė. Biol. Ther., 9: 975-989.
CrossRef |

146: Pelaia, G., G. Cuda, A. Vatrella, L. Gallelli ir M. Caraglia ir kt., 2005. Mitogeno aktyvuotos baltymų kinazės ir astma. J. Ląstelė. Physiol., 202: 642-653.
CrossRef |

147: Pennati, M., M. Folini ir N. Zaffaroni, 2007. Survivin taikymas vėžio terapijoje: įvykdyti pažadai ir atviri klausimai. Kancerogenezė, 28: 1133-1139.
CrossRef |

148: Pensato, S., M. Saviano ir A. Romanelli, 2007. Nauji peptidų nukleorūgščių analogai: sintezė ir taikymas. Eksperto nuomonė. Biol. Ther., 7: 1219-1232.
CrossRef |

149: Phillips, M. I., 2004. Antisense terapija. „Humana Press“ metodai Mol. Med., 106: 3-10.

150: Plummer, R., L. Vidal, M. Griffin, M. Lesley ir J. de Bono ir kt., 2009. I fazės tyrimas su žmogaus DNR metiltransferazės 1 oligonukleotidų antisense inhibitoriumi MG98, vartojamu 7 dienų infuzijos būdu. pacientams, sergantiems pažengusiais solidiniais navikais. Clin. Cancer Res., 15: 3177-3177.
CrossRef |

151: Popescu, F.D. ir F. Popescu, 2007. Antisense terapinių intervencijų, skirtų molekuliniams biologiniams taikiniams astmoje, apžvalga. Biologics, 1: 271-283.
Tiesioginė nuoroda |

152: Popescu, F. D., 2005. Farmakologinis astmos genų ekspresijos moduliavimas (apžvalga japonų ir anglų kalbomis). Int. Rev. Astma, 7: 74-90.

153: Rasool, S., M. Behari, M. Irshad, V. Goyal ir B.L. Jailkhani, 2008. Antikūnai prieš postsinapsinius acetilcholino receptorius ir presinapsinius membranos receptorius sergant miastenija. Tendencijos Med. Res., 3: 64-71.
CrossRef | Tiesioginė nuoroda |

154: Reidas, G. K., J. M. Bestermanas ir A. R. MacLeod, 2002. Selektyvus DNR metiltransferazės fermentų slopinimas kaip nauja vėžio gydymo strategija. Curr. Nuomonė. Mol. Ther., 4: 130-137.
Tiesioginė nuoroda |

155: Ritch, P., C.M. Rudin, J. D. Bitran, M. J. Edelman ir A. Makalinao ir kt., 2006. II fazės PKC-alfa antisense oligonukleotido aprinokarseno tyrimas kartu su gemcitabinu ir karboplatina pacientams, sergantiems pažengusiu nesmulkialąsteliniu plaučių vėžiu. Plaučių vėžys, 52: 173-180.
PubMed |

156: Rodonas, J., V. DeSantosas, jaunesnysis R.J. Ferry ir R. Kurzrock, 2008. Ankstyvas į insuliną panašių augimo faktoriaus I receptorių inhibitorių vaistų kūrimas: pirmųjų klinikinių tyrimų pamokos. Mol. Cancer Ther., 7: 2575-2588.
CrossRef |

157: Rose, M. G., M. P. Farrell ir J. C. Schmitz, 2002. Tymidilato sintazė: kritinis vėžio chemoterapijos taikinys. Clin. Kolorektalinis vėžys, 1: 220-229.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

158: Roychowdhury, D. ir M. Lahn, 2003. Antisense terapija, nukreipta į baltymų kinazę C-alfa (affinitak, LY900003/ISIS 3521): galimas vaidmuo sergant krūties vėžiu. Seminarai Oncol., 30: 30-33.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

159: Rudinas, C. M., J. Holmlundas, G. F. Fleming, S. Mani ir W.M. Stadler ir kt., 2001. ISIS 5132, antisensinio oligonukleotido c-raf-1 inhibitoriaus, I fazės bandymas, skiriamas 24 valandų per savaitę infuzija pacientams, sergantiems pažengusiu vėžiu. Clin. Cancer Res., 7: 1214-1220.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

160: Ryan, B. M., N. O'Donovan ir M. J. Duffy, 2009. Survivin: naujas priešvėžinės terapijos tikslas. Cancer Treat Rev., 35: 553-562.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

161: Sachdev, D., X. Zhang, I. Matise, G.M. Kelly ir D. Yee, 2010. Į I tipo insuliną panašus augimo faktoriaus receptorius reguliuoja vėžio metastazes nepriklausomai nuo pirminio naviko augimo, skatindamas invaziją ir išgyvenimą. Onkogenas, 29: 251-262.
CrossRef |

162: Salvesen, G. S. ir C. S. Duckett, 2002. IAP baltymai: blokuojantis kelią į mirtį. Nat. Kun. Mol. Ląstelė. Biol., 3: 401-410.
PubMed |

163: Sasaki, H., Y. Sheng, F. Kotsuji ir B.K. Tsang, 2000. X-susieto apoptozės baltymo inhibitoriaus reguliavimas sukelia chemoterapijai atsparių žmogaus kiaušidžių vėžio ląstelių apoptozę. Cancer Res., 60: 5659-5666.
PubMed |

164: Saxena, N., S. S. Lahiri, S. Hambarde ir R. P. Tripathi, 2008. RAS: Tikslas vėžio gydymui. Cancer Invest., 26: 948-955.
CrossRef |

165: Saxena, V. ir N.S.H.N. Moorthy, 2007. Į insuliną panašus augimo faktoriaus 1 receptorius: priešvėžinis taikinys, laukiantis smūgio. Int. J. Cancer Res., 3: 54-73.
CrossRef | Tiesioginė nuoroda |

166: Schindler, J. F., J. B. Monahan ir W. G. Smith, 2007. p38 kelio kinazės kaip priešuždegiminių vaistų taikiniai. J. Dentas. Res., 86: 800-811.
CrossRef | PubMed |

167: Schlingensiepen, K. H., B. Fischer-Blass, S. Schmaus ir S. Ludwig, 2008. Antisense terapija navikams gydyti: TGF-beta2 inhibitorius AP 12009 klinikiniame vystyme prieš piktybinius navikus. Naujausi rezultatai Cancer Res., 177: 137-150.
CrossRef | PubMed |

168: Schreiber, A., G. H rter, A. Schubert, D. Bunjes, T. Mertens ir D. Michel, 2009. Antivirusinis citomegalovirusinės infekcijos ir atsparių padermių gydymas. Eksperto nuomonė. Pharmacother., 10: 191-209.
CrossRef |

169: Seguinas, R. M. ir N. Ferrari, 2009. Naujos oligonukleotidų terapijos astmai ir lėtinei obstrukcinei plaučių ligai gydyti. Eksperto nuomonė. Investuoti Narkotikai, 18: 1505-1517.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

170: Sekhon, H.S., C.A. Londonas, M. Sekhon, P.L. Iversenas ir G. R. Devi, 2008. c-MYC antisense fosfosforodiamidato morfolino oligomeras slopina metastazes plaučiuose pelių naviko modelyje. Plaučių vėžys, 60: 347-354.
CrossRef |

171: Sereni, D., R. Tubiana, C. Lascoux, C. Katlama ir O. Taulera ir kt., 1999 m.. Į veną leidžiamo trecovirseno (GEM 91) ir antisense fosforotioato oligonukleotido farmakokinetika ir toleravimas ŽIV užsikrėtusiems asmenims. J. Clin. Pharmacol., 39: 47-54.
PubMed |

172: Sewellas, K. L., R. S. Geary, B.F. Baker, J.M. Glover ir T.G.K. Mant ir kt., 2002. ISIS 104838, 2 ir#8242-metoksietilo modifikuoto antisense oligonukleotido, skirto naviko nekrozės faktoriaus alfa, I fazės tyrimas. J. Pharmacol. Galioj. Ther., 303: 1334-1343.
CrossRef | PubMed |

173: Shahas, M.H., K.A. Varkeris, M. Collamore, J.A. Zwiebel, C. Daniel, K. David ir K.Y. Chung, 2009. G3139 (Genasense) pacientams, sergantiems pažengusia Merkel ląstelių karcinoma. Esu. J. Clin. Oncol., 32: 174-179.
CrossRef | PubMed |

174: Singh, J., G. Singh, N. Singh ir H. Kaur, 2011. Oralinis insulino tiekimas su įvairių rūšių HPMC žiurkėms, kurioms nėra diabeto. Tendencijos Med. Res., 6: 1-13.
CrossRef | Tiesioginė nuoroda |

175: Skolnik, E. Y., A. Batzer, N. Li, C. H. Lee ir E. Lowenstein ir kt., 1993. GRB2 funkcija susiejant insulino receptorius su Ras signalizacijos keliais. Mokslas, 260: 1953-1955.
CrossRef |

176: Sorbera, L. A., C. Dulsat ir E. Rosa, 2005. Terapiniai išsėtinės sklerozės tikslai „Drugs Future“, 34: 405-405.
CrossRef |

177: Sospedra, M. ir R. Martin, 2005. Išsėtinės sklerozės imunologija. Ann. Rev. Immunol., 23: 683-747.
CrossRef | PubMed | Tiesioginė nuoroda |

178: Spicuzza, L., D.G. Maria ir R. Polosa, 2006. Adenozinas kvėpavimo takuose: pasekmės ir taikymas. Euras. J. Pharmacol., 533: 77-88.
CrossRef |

179: Spizzo, R., D. Rushworth, M. Guerrero ir G.A. Calin, 2009. RNR slopinimas, mikroRNR ir nauji terapiniai agentai vėžio gydymui. Clin. Limfoma. Mielomos leukemija, 9: S313-S318.
CrossRef |

180: Stein, C. A., J. B. Hansen, J. Lai, S. Wu ir A. Voskresenskiy ir kt., 2010. Efektyvus genų nutildymas pristatant užrakintus nukleorūgšties antisense oligonukleotidus, kuriems nepadeda transfekcijos reagentai. Nucleic Acids Res., 38: e3-e3.
CrossRef |

181: Chia, S., S. Dent, S. Ellard, P.M. Ellis ir T. Vandenberg ir kt., 2009. II fazės OGX-011 tyrimas kartu su docetakseliu metastazavusiam krūties vėžiui. Clin. Cancer Res., 15: 708-713.
CrossRef |

182: Stephens, A.C., 2004. Technologijų vertinimas: AVI-4126, AVI BioPharma. Curr. Nuomonė. Mol. Ther., 6: 551-558.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

183: Sussman, J. D., Z. Argov, D. McKee, E. Hazum, S. Brawer ir H. Soreq, 2008. Antisense gydymas myasthenia gravis: Patirtis naudojant monarsen. Ann. N. Y. akad. Sci., 1132: 283-290.
CrossRef | PubMed | Tiesioginė nuoroda |

184: Suzuki, J., N. Miyano-Kurosaki, T. Kuwasaki, H. Takeuchi, G. Kawai ir H. Takaku, 2002. 1 tipo žmogaus imunodeficito viruso aktyvumo slopinimas in vitro nauju savaime stabilizuotu oligonukleotidu su guanozinu-timidinu keturkampiai motyvai. J. Virol., 76: 3015-3022.
CrossRef |

185: Swarbrick, M. M., P. J. Havelis, A. A. Levinas, A. A. Bremeris ir K. L. Stanhope ir kt., 2009. Baltymų tirozino fosfatazės-1B slopinimas antisense oligonukleotidais pagerina jautrumą insulinui ir padidina beždžionių adiponektino koncentraciją. Endokrinologija, 150: 1670-1679.
CrossRef |

186: Tamm, I., B. Doerken ir G. Hartmann, 2001. Antisense terapija onkologijoje: nauja senos idėjos viltis? Lancet, 358: 489-497.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

187: Tan, S. L., A. Pause, Y. Shi ir N. Sonenberg, 2002. Hepatito C terapija: dabartinė būklė ir naujos strategijos. Nat. Rev. Drug Discov., 1: 867-881.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

188: Taragh, Z. ir E. Ilali, 2010. Išsėtine skleroze sergančių pacientų gyvenimo kokybė. J. Applied Sci., 10: 1485-1488.
CrossRef | Tiesioginė nuoroda |

189: Tarhini, A.A. ir J. M. Kirkwood, 2007. Oblimersen gydant metastazavusią melanomą. Ateitis Oncol., 3: 263-271.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

190: Tilley, J.W., 2008. Labai vėlyvi antigeno-4 integrino antagonistai. Eksperto nuomonė. Terapiniai patentai, 18: 841-859.
CrossRef |

191: Veedu, R. N. ir J. Wengel, 2009. Užrakinta nukleorūgštis kaip nauja terapinių agentų klasė. RNR Biol., 6: 321-333.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

192: Villalona-Calero, M.A., P.Ritch, J.A. Figueroa, G.A. Otterson ir R. Belt ir kt., 2004. I/II fazės tyrimas su LY.900003, antisense baltymų kinazės C-alfa inhibitoriumi, kartu su cisplatina ir gemcitabinu pacientams, sergantiems pažengusia nesmulkialąsteliniu plaučių vėžiu. Clin. Cancer Res., 10: 6086-6093.
CrossRef |

193: Wajant, H., K. Pfizenmaier ir P. Scheurich, 2003. Naviko nekrozės faktoriaus signalizacija. Ląstelių mirtis skiriasi, 10: 45-65.
CrossRef | PubMed | Tiesioginė nuoroda |

194: Wei, L., T. Xue, J. Wang, B. Chen ir Y. Lei ir kt., 2009. Klasterino vaidmuo progresuojant, atsparumas chemoterapijai ir žmogaus kiaušidžių vėžio metastazės. Int. J. Vėžys, 125: 791-806.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

195: White, P. J., L. M. Atley ir C. J. Wraight, 2004. Antisense oligonukleotidų gydymas psoriazei. Eksperto nuomonė. Biol. Ther., 4: 75-81.
CrossRef |

196: Winquist, E., J. Knox, JP Ayoub, L. Wood ir N. Wainman ir kt., 2006. II fazės DNR metiltransferazės 1 slopinimo tyrimas su antisense oligonukleotidu MG98 pacientams, sergantiems metastazavusia inkstų karcinoma: Nacionalinis vėžio institutas Kanados klinikinių tyrimų grupės tiriamasis naujų vaistų tyrimas. Investuoti Nauji vaistai, 24: 159-167.
CrossRef | PubMed |

197: Wood, M., H. Yin ir G. McClorey, 2007. Ligos genų ekspresijos moduliavimas naudojant RNR pagrįstą terapiją. PloS Genet., 3: e109-e109.
CrossRef |

198: Yamaguchi, K., B. Papp, D. Zhang, A.N. Ali, S. Agrawal ir R.A. Byrn, 1997. GEM 91, gag antisense fosforotioato oligonukleotido, dauginiai slopinamieji mechanizmai, skirti 1 tipo žmogaus imunodeficito virusui. AIDS Res. Hum. Retrovirusai, 13: 545-554.
PubMed |

199: Yokota, T., N. Sakamoto, N. Enomoto, Y. Tanab ir M. Miyagishi ir kt., 2003. Ląstelinio hepatito C viruso replikacijos slopinimas sintetinėmis ir iš vektoriaus gautomis mažomis trukdančiomis RNR. EMBO Rep., 4: 602-608.

200: Yoon, L., V. Aikaterini, F. Ningping, J. Hongnan ir W. Ming ir kt., 2006. GTI-2501, antisense agentas, nukreiptas į R1, didelį žmogaus ribonukleotido reduktazės subvienetą, rodo stiprų priešnavikinį aktyvumą prieš įvairius navikus. Int. J. Oncol., 28: 469-478.
PubMed |

201: Yoshitaka, I., I. Enyu, T. Shiro ir R. Hiromi, 2008. Oligonukleotidiniai vaistai. Eksperto nuomonė. Narkotikų atradimas, 3: 991-996.
CrossRef |

202: Yu, R.Z., R.S. Geary, J.D. Flaim, G.C. Riley, D.L. Tribble, A.A. Vlietas ir M.K. Wedel, 2009. Trūksta farmakokinetinės mipomerseno natrio (ISIS 301012), 2'-O-metoksietilo modifikuoto antisense oligonukleotido, nukreipto į apolipoproteino B-100 pasiuntinio RNR, sąveikos su simvastatinu ir ezetimibu. Clin. Farmakokinetas, 49: 39-50.
Tiesioginė nuoroda |

203: Zamecnik, P.C. ir M. L. Stephenson, 1978. Rous sarkomos viruso replikacijos ir ląstelių transformacijos slopinimas specifiniu oligodeoksinukleotidu. Proc. Natl. Akad. Sci., 75: 280-284.
Tiesioginė nuoroda |

204: Zamore, P.D. ir N. Aroninas, 2003. siRNR numuša hepatitą. Nat. Med., 9: 266-267.
PubMed |

205: Zhang, Z., 2002. Technologijų vertinimas: EPI-2010, EpiGenesis. Curr. Nuomonė. Mol. Ther., 4: 275-280.
PubMed | Tiesioginė nuoroda |

206: Zheng, R., 1999. Technologijos įvertinimas: GEM-92, Hybridon Inc. Curr. Nuomonė. Mol. Ther., 1: 521-523.
Tiesioginė nuoroda |

207: Zon, G., 1995. Antisense fosforotioato oligodeoksinukleotidai: įvadinės sąvokos ir galimi toksiškumo molekuliniai mechanizmai. Toxicol. Lett., 82-83: 419-424.
CrossRef |

208: Van Aerschot, A., 2006. Oligonukleotidai kaip antivirusiniai vaistai: svajonė ar tikroviška perspektyva. Antivirusinis Res., 71: 307-316.
PubMed |

209: Manoharan, M., 1999. 2'-angliavandenių modifikacijos antisense oligonukleotidų terapijoje: konformacijos, konfigūracijos ir konjugacijos svarba. Biochim. Biofizai. Acta (BBA) - genų struktūros išraiška, 1489: 117-130.
CrossRef |

210: De Marisa, F., F. Amalia, O. Francesco, R. Attilio ir C. Marilena ir kt., 2006. Žiurkių miego arterotomija: C-myc dalyvauja neigiamame remodeliavime ir apoptozėje. J. Cardiovasc. Med., 7: 61-67.
CrossRef | Tiesioginė nuoroda |


REZULTATAI

Antisense ODN ir PFV citoplazminė lokalizacija ankstyvame inkubacijos metu

Ankstesniuose tyrimuose mes parodėme sustiprintą in vitro antisense įsisavinimas ląstelėse, tiekiant PFV. Todėl šiais tyrimais buvo siekiama apibūdinti tiek oligonukleotido, tiek PFV nešiklio pasiskirstymą ir prekybą ląstelėse. Tai buvo tiriama dviejose ląstelių linijose: HEK 293 ir 518A2 ląstelėse. Laisvos antisense, katijoninės liposomos/ antisense kompleksai arba PFV kapsuliuotas antisense ODN buvo pridėtas prie ląstelių galutine 0,5 µM koncentracija. Preliminari prekyba antisense ODN ir PFV buvo ištirta stebint FITC pažymėto ODN ir Rh -PE pažymėto PFV pasiskirstymą naudojant konfokalinę mikroskopiją. Kaip parodyta 1 paveiksle, antisense kaupimasis ir pasiskirstymas ląstelėse labai priklausė nuo nešiklio pristatymo. Kai antisense ODN buvo inkubuojamas su ląstelėmis 4 valandas kaip laisvas agentas, ląstelių įsisavinimas paprastai buvo labai prastas, nors 518A2 ląstelės parodė šiek tiek didesnį fluorescencijos intensyvumą nei HEK 293 ląstelės (1 pav. A ir D). Priešingai, ląstelės demonstravo didžiulį tiek nešiklio, tiek antisense ODN internalizavimą, kai antisense ODN buvo pristatytas PFV (1 pav. B ir E). Po 4 valandų didžioji dalis antisense ODN buvo lokalizuota kartu su PFV ląstelių citoplazmoje kaip taškinė fluorescencija. Ši žalios FITC fluoroforo ir raudonojo rodamino fluoroforo lokalizacija sukelia pastebėtą geltoną spalvą. Be to, taip pat buvo pastebėta tam tikra raudona fluorescencija, daugiausia pasiskirsčiusi aplink ląstelių plazmos membranas. Tačiau jo intensyvumas buvo labai silpnas, palyginti su bendrai lokalizuota fluorescencine emisija. Panašiai buvo pastebėtos gana silpnos žalios fluorescencinės dėmės, išsibarsčiusios kai kurių ląstelių citoplazminiame skyriuje. Tai gali reikšti žemą laisvo antisenso lygį net šiuo 4 val. Abiejose ląstelių linijose bendro lokalizuoto nešiklio ir ODN kaupimasis daugiausia buvo perinukleariniuose regionuose. Šis tarpląstelinio pasiskirstymo modelis skyrėsi nuo to, kuris buvo pastebėtas, kai ODN buvo pristatytas katijoninių liposomų - ODN kompleksų pavidalu. Kaip parodyta 1 C ir F paveiksluose, naudojant katijoninius liposomų kompleksus, dauguma antisense ODN greitai susikaupė ląstelių branduolyje ir tik nedidelė procentinė dalis vis dar buvo citoplazmoje, ypač perinuklearinėje srityje, 4 val. Šis modelis atitinka ankstesnius literatūros pastebėjimus ir rodo, kad katijoninės liposomos yra veiksmingas ODN pristatymo tarpininkas (22–25). Antisense ODN branduolinis pasiskirstymas nebuvo vienalytis. Kaip rodo fluorescencijos intensyvumas, oligonukleotidų iš esmės nebuvo branduolio skyriuje. PFV tarpininkaujamo antisense ODN internalizavimui ir vėlesniam kaupimuisi aplink perinuklearinį regioną dar būdingas z -Pozicinis lazerinis skenavimas (2 pav.). Šios optinės sekcijos aiškiai parodė, kad 1 E paveiksle parodyta intensyvi fluorescencija daugiausia kilo iš vidinio FITC - ODN ir atsirado ne dėl plazmos membranos prisijungimo.

Nuo laiko priklausomas antisense ODN išsiskyrimas iš PFV

Norint suaktyvinti antisense efektą, ODN reikia atleisti iš nešiklio ir sudaryti galimybę susieti tikslinį pranešimą. Akivaizdu, kad po 4 valandų inkubacijos PFV nešiklis efektyviai sukėlė antisensės kaupimąsi citoplazminiame skyriuje. Kitas klausimas buvo, ar susikaupęs antisense ODN gali būti išleistas iš PFV nešiklio, išeiti iš citoplazmos skyriaus ir pasiekti branduolį. Tai buvo ištirta stebint PFV - ODN tarpląstelinį pasiskirstymą 24–48 val. Po 24 valandų inkubacijos ląstelės parodė laisvo FITC - ODN požymius (3 pav.). Tai buvo aiškiau parodyta 518A2 ląstelėse (3 pav. B). Palyginus Rh -PE pasiskirstymą (raudona fluorescencija) su FITC -ODN pasiskirstymu (žalia fluorescencija) toje pačioje ląstelėje (3 pav. B -1 ir B -2), matyti, kad PFV yra plačiai pasiskirstę ląstelėje citoplazma, o FITC - ODN daugiausia kaupiasi aplink branduolį arba jo viduje. Šis ODN atskyrimas nuo PFV nešiklio ir vėlesnė migracija į branduolį buvo dar akivaizdesnis po 48 valandų inkubacijos su PFV - ODN (4 pav.). Kaip parodyta 4 paveiksle, intensyvi branduolinė fluorescencija (FITC) matoma PFV - ODN pristatymui (4 pav. B ir D). Nors viena 518A2 ląstelė 4B paveiksle rodo apoptozės požymius, kitos ląstelės vis dar turėjo nepažeistas ląstelių membranas, o tai yra tvirtas jų gyvybingumo įrodymas. Šiose gyvybingose ​​ląstelėse FITC - ODN buvo paskirstytas tiek citoplazmoje, tiek branduolyje, o Rh -PE etiketė liko tik citoplazmoje (4 pav. B -1 ir B -2). Panašus modelis buvo pastebėtas ir HEK 293 ląstelėse (4 pav. D), tačiau su daug mažesniu fluorescencijos intensyvumu. Priežastis, kodėl HEK 293 ląstelės rodo mažiau branduolinės fluorescencijos, nėra aiški. Kaip parodyta po antisense pristatymo naudojant katijonines liposomas, FITC - ODN pasiskirstymas ląstelės branduolyje nebuvo vienalytis, o oligonukleotidas buvo pašalintas iš branduolių.

PFV - ODN poveikis ląstelių citotoksiškumui

Gerai žinoma, kad katijoniniai lipidai yra labai toksiški ląstelėms. Kadangi PFV yra katijoninis lipidas DODAC, mes atlikome eksperimentus, kad ištirtume galimą PFV - ODN toksiškumą 518A2 ir HEK 293 ląstelėse. Ląstelės buvo gydomos PFV kontroliuojančiu ODN arba katijoniniais liposomų kontrolės ODN kompleksais įvairiomis koncentracijomis 24 ar 48 val. Šiais laikais ląstelės buvo apdorotos ir citotoksiškumas įvertintas XTT tyrimu. Kaip parodyta 5 paveiksle, tiek 518A2, tiek HEK 293 ląstelės turėjo stiprų citotoksinį poveikį, kai buvo apdorotos katijoninių liposomų - ODN kompleksais. Šis toksiškumas buvo pastebėtas net ir esant 50 µM lipidų koncentracijai. Abiejose ląstelių linijose mažiau nei 10% ląstelių buvo gyvybingos po 24 valandų inkubacijos, o po 48 valandų buvo pastebėta nedaug gyvybingų ląstelių. Šis rezultatas atitiko mūsų pastebėjimus apie katijonines liposomas - OND kompleksą apdorotas ląsteles, atliekant konfokalinę mikroskopiją. Priešingai nei katijoniniai liposomų - ODN kompleksai, PFV - ODN kompozicija buvo mažiau citotoksinė abiem tirtoms ląstelių linijoms. Kaip matyti 5 paveiksle, po 24 valandų inkubacijos su PFV - ODN, ~ 80% ląstelių buvo gyvybingos esant mažai lipidų koncentracijai. Padidėjus lipidų koncentracijai, pastebėtas laipsniškas ląstelių gyvybingumo mažėjimas. Tačiau net ir esant santykinai didelei lipidų koncentracijai (600 µM) ir gt60% ląstelių gyvybingumui. Ilgesni ekspozicijos laikotarpiai dar labiau sumažino ląstelių gyvybingumą, kai ląstelės buvo inkubuojamos su PFV - ODN. Esant didžiausiai ištirtai lipidų koncentracijai (600 µM), ląstelių gyvybingumas per 48 valandas sumažėjo iki 30–40%.

Nuo laiko priklausomas PFV uždengto antisense ODN biologinis aktyvumas

Galima tikėtis, kad nuo laiko priklausomas antisense ODN išsiskyrimas iš PFV ir vėlesnė migracija į branduolį gali sukelti vėlavimą sumažinti tikslinės mRNR reguliavimą. Todėl mes atlikome žmogaus melanomos ląstelių 518A2 linijos tyrimą, naudodamiesi G3139, 18mer antisense ODN, nukreiptu į žmogų bcl -2 genas. Ankstesni tyrimai parodė, kad ši antisense konstrukcija, pristatyta naudojant katijonines liposomas, veiksmingai sumažina tikslinį pranešimą ir dėl to gali labai sumažėti baltymų ekspresijos lygis (26). Tačiau ankstesniame tyrime stebėjome tik lengvą, bet nuoseklų mRNR ekspresijos sumažėjimą, kai ląstelės 48 valandas buvo gydomos PFV - ODN esant 1,0 µM (16). Remdamiesi dabartiniais pastebėjimais, mes spėliojome, kad šį mažą aktyvumą galėjo lemti antisense ODN, pristatytas naudojant PFV, kuris nėra visiškai prieinamas subcelluliarinio taikinio surišimui, arba lėtai išsiskiriančio antisense ODN koncentracija yra mažesnė už slenkstinį lygį, kurio reikia norint pasiekti reikšminga veikla. Todėl šiame tyrime mes ištyrėme didesnę PFV - ODN koncentraciją ilgesniais ekspozicijos laikotarpiais. Ląstelės (518A2) 24, 48 arba 72 valandas buvo apdorotos laisvu antisense, tuščiu PFV, PFV kapsuliuotu kontroliniu ODN G3622 arba PFV kapsuliuotu antisense ODN G3139, esant 3,0 µM (arba lygiavertei PFV koncentracijai) antisense. Kiekvienu laiko momentu ląstelės buvo surinktos ir apdorotos mRNR ekspresijai, naudojant RT - PCR. Duomenys pateikti 6 paveiksle. Kaip matyti, antisensėms būdingas žemesnis reguliavimas bcl -2 mRNR buvo aiškiai pastebėta, kai ląstelės buvo paveiktos PFV kapsuliuotu antisense. Esant ištirtai antisense koncentracijai, po 24 valandų inkubacijos mRNR lygis sumažėjo ~ 50%, o ląstelėms, apdorotoms laisva antisense, tuščia PFV arba PFV uždengta kontroline ODN, nepastebėta jokio sumažėjusio reguliavimo poveikio. Po 48 valandų inkubacijos PFV - antisense ODN apdorotos ląstelės dar labiau sumažino mRNR lygį ~ 65%, palyginti su kontrolinėmis ląstelėmis. Galiausiai, praėjus 72 valandoms, mRNR ekspresija šiose ląstelėse sumažėjo 80%, palyginti su ląstelėmis, apdorotomis laisvu antisense, tuščiu PFV arba PFV kontroliuojančiu ODN. Pastebėta, kad vien tik citotoksiškumo poveikis gali sukelti tikslinį geno slopinimą, o tai neturi nieko bendro su antisense ODN (27). Kadangi nuo bcl -2 genas dalyvauja ląstelių apoptozės kelyje, yra tikimybė, kad jo ekspresiją paveiks ląstelių gyvybingumas. Remdamiesi šiuo susirūpinimu, mes naudojome tuščią PFV kaip kontrolę, kad galėtume stebėti bet kokį galimą nespecifinį poveikį bcl -2 mRNR lygis dėl citotoksiškumo. Mūsų rezultatai rodo, kad visais išbandytais laiko momentais ląstelės neparodė reikšmingo mRNR lygio sumažėjimo, kai buvo apdorotos tuščiu PFV, kuris buvo toksiškesnis ląstelėms nei lygiavertė PFV - ODN koncentracija (duomenys nerodomi). Panašiai, kai ląstelės buvo paveiktos PFV kapsuliuotu kontroliniu ODN, kurio bazinė seka yra tokia pati kaip G3139, tačiau atvirkštinio poliškumo, išlaikant CpG motyvus, mRNR sumažėjimas taip pat nebuvo akivaizdus. Todėl darome išvadą, kad pastebėtas sumažėjimas bcl -2 mRNR lygis atsirado dėl antisense ODN specifinio poveikio.


Autoriai norėtų pripažinti FEDER lėšas per „Programa Operacional Factores de Competitividade 𠅌OMPETE“ ir Portugalijos fondus per FCT 𠅏unda ç ão para a Ci ência ea Tecnologia (PTDC/CTM4-N/, ICT/0020/2010 ir PEst-C/SAU/LA0002/2013). Pedro M. D. Moreno remia Europos bendrijos Marie Curie veiksmas ir#x00027 septintoji bendroji programa (PIEF-GA-2011-300485).

Adiseshaiah, P. P., Hall, J. B. ir McNeil, S. E. (2010). Veiksmingumo ir toksiškumo įvertinimo nanomedžiagų standartai. „Wiley Interdiscip“. Kun. Nanomedas. Nanobiotechnolis. 2, 99 ir#x02013112. d.: 10.1002/wnan.66

Agrawal, S., Temsamani, J., Galbraith, W. ir Tang, J. (1995). Antisense oligonukleotidų farmakokinetika. Clin. Farmakokinetika. 28, 7 ir#x0201316. doi: 10.2165/00003088-199528010-00002

Alkilany, A. M. ir Murphy, C. J. (2010). Toksiškumas ir aukso nanodalelių įsisavinimas ląstelėse: ką mes sužinojome iki šiol? J. Nanopartas. Res. 12, 2313 ir#x020132333. doi: 10.1007/s11051-010-9911-8

Badros, A. Z., Goloubeva, O., Rapoport, A. P., Ratterree, B., Gahres, N., Meisenberg, B. ir kt. (2005). II fazės G3139, Bcl-2 antisense oligonukleotido, derinio su deksametazonu ir talidomidu, tyrimas pacientams, sergantiems recidyvuojančia daugybine mieloma. J. Clin. Oncol. 23, 4089 ir#x020134099. doi: 10.1200/JCO.2005.14.381

Barchet, W., Wimmenauer, V., Schlee, M. ir Hartmann, G. (2008). Prieiga prie imunostimuliuojančių nukleorūgščių terapinio potencialo. Curr. Nuomonė. Immunol. 20, 389 ir#x02013395. doi: 10.1016/j.coi.2008.07.007

Bennett, C. F. ir Swayze, E. E. (2010). RNR, nukreipta į terapiją: antisense oligonukleotidų, kaip terapinės platformos, molekuliniai mechanizmai. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 50, 259 ir#x02013293. doi: 10.1146/annurev.pharmtox.010909.105654

Berger, I., Tereshko, V., Ikeda, H., Marquez, V. E. ir Egli, M. (1998). B-DNR kristalinės struktūros su 2 ir#x02032-deoksi-2 ′-fluoro-arabino-furanozil timinais: konformacinio išankstinio organizavimo pasekmės dvipusio stabilumo užtikrinimui. Nucleic Acids Res. 26, 2473 ir#x020132480. doi: 10.1093/nar/26.10.2473

Bestas, B., Moreno, P. M., Blomberg, K. E., Mohammad, D. K., Saleh, A. F., Sutlu, T. ir kt. (2014). Suskaidymus koreguojantys oligonukleotidai atkuria BTK funkciją X susietame agammaglobulinemijos modelyje. J. Clin. Investuoti. 124, 4067 ir#x020134081. doi: 10.1172/JCI76175

Brown, D. A., Kang, S. H., Gryaznov, S. M., Dedionisio, L., Heidenreich, O., Sullivan, S. ir kt. (1994). Oligodeoksinukleotidų modifikavimo fosforotioatu poveikis specifiniam prisijungimui prie baltymų. J. Biol. Chem. 269, 26801 ir#x0201326805.

Chauhan, V. P., Stylianopoulos, T., Boucher, Y. ir Jain, R. K. (2011). Molekulinių ir nanodalelių vaistų pristatymas į navikus: transporto kliūtys ir strategijos. Annu. Rev. Chem. Biomol. Inž. 2, 281 ir#x02013298. doi: 10.1146/annurev-chembioeng-061010-114300

Chauhan, V. P., Stylianopoulos, T., Martin, J. D., Popovic, Z., Chen, O., Kamoun, W. S. ir kt. (2012). Naviko kraujagyslių normalizavimas pagerina nanomedicinos tiekimą priklausomai nuo dydžio. Nat. Nanotechnolis. 7, 383 ir#x02013388. doi: 10.1038/nnano.2012.45

Crooke, S. T., Graham, M. J., Zuckerman, J. E., Brooks, D., Conklin, B. S., Cummins, L. L. ir kt. (1996). Kelių naujų oligonukleotidų analogų farmakokinetinės savybės pelėms. J. Pharmacol. Galioj. Ther. 277, 923 ir#x02013937.

Delong, R. K., Nolting, A., Fisher, M., Chen, Q., Wickstrom, E., Kligshteyn, M. ir kt. (1997). Fosforotioato, fosforoditioato ir metilfosfonato oligonukleotidų palyginamoji farmakokinetika, pasiskirstymas audiniuose ir naviko kaupimasis nuogoms pelėms. Antisense nukleorūgšties vaistų kūr. 7, 71 ir#x0201377. doi: 10.1089/oli.1.1997.7.71

Devi, G. R., Beer, T. M., Corless, C. L., Arora, V., Weller, D. L. ir Iversen, P. L. (2005). In vivo c-MYC antisense fosforodiamidato morfolino oligomero, AVI-4126, biologinis prieinamumas ir farmakokinetika esant kietiems navikams. Clin. Cancer Res. 11, 3930 ir#x020133938. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-04-2091

Ding, Y., Jiang, Z., Saha, K., Kim, C. S., Kim, S. T., Landis, R. F. ir kt. (2014). Auksinės nanodalelės nukleorūgščių tiekimui. Mol. Ther. 22, 1075 ir#x020131083. doi: 10.1038/mt.2014.30

Dirin, M. ir Winkler, J. (2013). Įvairių cheminių modifikacijų įtaka antisense oligonukleotidų ADME charakteristikoms ir toksikologijai. Eksperto nuomonė. Biol. Ther. 13, 875 ir#x02013888. doi: 10.1517/14712598.2013.774366

Distreser, P., Kryczka, A., Liu, Y., Badi, Y. E., Wong, J. J., Owen, J. S. ir kt. (2014). Terapinių sujungimą perjungiančių oligonukleotidų kūrimas. Hum. Gene Ther. 25, 587 ir#x02013598. doi: 10.1089/hum.2013.234

Eckstein, F. (1967). Dinukleozido fosforotioatas. Tetraedras Lett. 8, 1157 ir#x020131160. doi: 10.1016/S0040-4039 (00) 90656-7

Fang, J., Nakamura, H. ir Maeda, H. (2011). EPR efektas: unikalios naviko kraujagyslių savybės, susijusios su vaistų tiekimu, susiję veiksniai, poveikio apribojimai ir padidinimas. Adv. Vaisto pristatymas. Rev. 63, 136 ir#x02013151. doi: 10.1016/j.addr.2010.04.009

Geary, R. S. (2009). Antisense oligonukleotidų farmakokinetika ir metabolizmas. Eksperto nuomonė. Vaistas Metab. Toxicol. 5, 381 ir#x02013391. doi: 10.1517/17425250902877680

Gekeler, V., Gimmnich, P., Hofmann, H. P., Grebe, C., Rommele, M., Leja, A. ir kt. (2006). G3139 ir kiti CpG turintys imunostimuliuojantys fosforotioato oligodeoksinukleotidai yra stiprūs žmogaus naviko ksenografų augimo slopintojai pelėms. Oligonukleotidai 16, 83 ir#x0201393. doi: 10.1089/oli.2006.16.83

Gokhale, P. C., Zhang, C., Newsome, J. T., Pei, J., Ahmad, I., Rahman, A. ir kt. (2002). Galuose modifikuoto raf antisense oligodeoksiribonukleotido, įterpto į naują katijoninę liposomą, farmakokinetika, toksiškumas ir veiksmingumas. Clin. Cancer Res. 8, 3611 ir#x020133621.

Gomes, C. P., Ferreira Lopes, C. D., Duarte Moreno, P. M., Varela-Moreira, A., Alonso, M. J. ir P êgo, A. P. (2014). Chitozano vertimas į klinikinį vaistų, kurių pagrindą sudaro nukleorūgštys, pristatymą. Ponia Jautis. 39, 60 ir#x0201370. doi: 10.1557/m.2013.314

Graham, M. J., Crooke, S. T., Monteith, D. K., Cooper, S. R., Lemonidis, K. M., Stecker, K. K. ir kt. (1998). In vivo fosforotioato oligonukleotido pasiskirstymą ir metabolizmą žiurkių kepenyse po intraveninio vartojimo. J. Pharmacol. Galioj. Ther. 286, 447 ir#x02013458.

Hammondas, S. M. ir Woodas, M. J. (2011). Genetinis gydymas RNR klaidingai sujungiančioms ligoms. Genetinės tendencijos. 27, 196 ir#x02013205. doi: 10.1016/j.tig.2011.02.004

Henry, S. P., Templinas, M. V., Gillettas, N., Rojko, J. ir Levinas, A. A. (1999). Fosforotioato oligonukleotido, skirto slopinti ICAM-1, toksiškumo ir farmakokinetinių savybių koreliacija. Toxicol. Patolis. 27, 95 ir#x02013100. doi: 10.1177/019262339902700117

Henry, S., Stecker, K., Brooks, D., Monteith, D., Conklin, B. ir Bennett, C. F. (2000). Chemiškai modifikuoti oligonukleotidai sumažina pelių imuninę stimuliaciją. J. Pharmacol. Galioj. Ther. 292, 468 ir#x02013479.

Hong, D. S., Kurzrock, R., Oh, Y., Wheler, J., Naing, A., Brail, L. ir kt. (2011). 1 fazės dozės didinimas, farmakokinetika ir farmakodinaminis eIF-4E antisense oligonukleotido LY2275796 įvertinimas pacientams, sergantiems pažengusiu vėžiu. Clin. Cancer Res. 17, 6582 ir#x020136591. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-11-0430

Hovingh, K., Besseling, J. ir Kastelein, J. (2013). Mipomerseno natrio (Kynamro) veiksmingumas ir saugumas. Eksperto nuomonė. Narkotikų seifas. 12, 569 ir#x02013579. doi: 10.1517/14740338.2013.793670

Iversenas, P. L., Copple, B. L. ir Tewary, H. K. (1995). Fosforotioato oligonukleotidų farmakologija ir toksikologija pelėms, žiurkėms, beždžionėms ir žmonėms. Toxicol. Lett. 82 ir#x0201383, 425 ir#x02013430. doi: 10.1016/0378-4274 (95) 03572-9

Jaaskelainen, I., Peltola, S., Honkakoski, P., Monkkonen, J. ir Urtti, A. (2000). Efektyviam anti-jutimo fosforotioato oligonukleotidų tiekimui į ląsteles reikalingas lipidų nešiklis su aktyviu membranos komponentu ir nedideliu komplekso dydžiu. Euras. J. Pharm. Sci. 10, 187 ir#x02013193. doi: 10.1016/S0928-0987 (00) 00068-3

Jain, R. K. (2012). Molekulinių ir ląstelių vaistų pristatymas į kietus navikus. Adv. Vaisto pristatymas. Rev. 64, 353 ir#x02013365. doi: 10.1016/j.addr.2012.09.011

Jang, S. H., Wientjes, M. G., Lu, D. ir Au, J. L. (2003). Vaistų pristatymas ir transportavimas į kietus navikus. Pharm. Res. 20, 1337 ir#x020131350. doi: 10.1023/A: 1025785505977

Juliano, R., Bauman, J., Kang, H. ir Ming, X. (2009). Biologinės kliūtys gydymui antisense ir siRNR oligonukleotidais. Mol. Pharm. 6, 686 ir#x02013695. doi: 10.1021/mp900093r

Juliano, R. L., Ming, X. ir Nakagawa, O. (2012). Oligonukleotidų konjugatų chemija ir biologija. Pask. Chem. Res. 45, 1067 ir#x020131076. doi: 10.1021/ar2002123

Kawai, G., Yamamoto, Y., Kamimura, T., Masegi, T., Sekine, M., Hata, T. ir kt. (1992). Konformacinis tam tikrų pirimidino liekanų standumas tRNR atsiranda dėl transkripcijos modifikacijų, kurios sustiprina sterinę bazės ir 2 ′-hidroksilo grupės sąveiką. Biochemija 31, 1040 ir#x020131046. doi: 10.1021/bi00119a012

Kibler-Herzog, L., Zon, G., Uznanski, B., Whittier, G. ir Wilson, W. D. (1991). Dviejų pusių fosforotioato, metilfosfonato ir dviejų DNR 14-mersų RNR analogų stabilumas. Nucleic Acids Res. 19, 2979 ir#x020132986. doi: 10.1093/nar/29.11.2979

Koshkin, A. A., Singh, S. K., Nielsen, P., Rajwanshi, V. K., Kumar, R., Meldgaard, M. ir kt. (1998). LNA (užrakintos nukleorūgštys): adenino, citozino, guanino, 5-metilcitozino, timino ir uracilo biciklonukleozido monomerų sintezė, oligomerizacija ir precedento neturintis nukleorūgščių atpažinimas. Tetraedras 54, 3607 ir#x020133630. doi: 10.1016/S0040-4020 (98) 00094-5

Krieg, A. M., Guga, P. ir Stec, W. (2003). Nuo P-chiralumo priklausomas imuninis aktyvavimas fosforotioato CpG oligodeoksinukleotidais. Oligonukleotidai 13, 491 ir#x02013499. doi: 10.1089/154545703322860807

Krieg, A. M. ir Stein, C. A. (1995). Fosforotioato oligodeoksinukleotidai: antisense ar anti-baltymai? Antisense Res. Dev. 5, 241.

Manoharanas, M. (1999). 2 ′ angliavandenių modifikacijos gydant antisense oligonukleotidus: konformacijos, konfigūracijos ir konjugacijos svarba. Biochim. Biofizai. Acta 1489, 117 ir#x02013130. doi: 10.1016/S0167-4781 (99) 00138-4

Meidan, V. M., Glezer, J., Amariglio, N., Cohen, J. S. ir Barenholz, Y. (2001). Oligonukleotidiniai lipopleksai: oligonukleotidų sudėties įtaka kompleksui. Biochim. Biofizai. Acta 1568, 177 ir#x02013182. doi: 10.1016/S0304-4165 (01) 00216-1

Minshull, J. ir Hunt, T. (1986). Vienos grandinės DNR ir RNazės H naudojimas siekiant skatinti kiekybinį ir#x0201C hibridinį vertimo sustabdymą ir#x0201D mRNR/DNR hibridus atliekant vertimus be retikulocitų lizato. Nucleic Acids Res. 14, 6433 ir#x020136451. doi: 10.1093/nar/14.16.6433

Mocanu, J. D., Yip, K. W., Skliarenko, J., Shi, W., Busson, P., Lo, K. W. ir kt. (2007). Antisense mikrodiskirstymo vaizdavimas ir moduliavimas kietų žmogaus ksenografinių navikų modeliuose. Clin. Cancer Res. 13, 5935 ir#x020135941. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-06-3085

Monia, B. P., Lesnik, E. A., Gonzalez, C., Lima, W. F., McGee, D., Guinosso, C. J. ir kt. (1993). 2 ′ modifikuotų oligonukleotidų, turinčių 2 ′-deoksi tarpų, įvertinimas kaip antisense genų ekspresijos inhibitoriai. J. Biol. Chem. 268, 14514 ir#x0201314522.

Mou, T. C., Grey, C. W., Terwilliger, T. C. ir Grey, D. M. (2001). Ff geno 5 baltymas turi didelį surišimo afinitetą vienos grandinės fosforotioato DNR. Biochemija 40, 2267 ir#x020132275. doi: 10.1021/bi002136f

Nakamura, H., Oda, Y., Iwai, S., Inoue, H., Ohtsuka, E., Kanaya, S. ir kt. (1991). Kaip RNazė H atpažįsta DNR.RNR hibridą? Proc. Natl. Akad. Sci. JAV. 88, 11535 ir#x0201311539. doi: 10.1073/pnas.88.24.11535

Netti, P. A., Berk, D. A., Swartz, M. A., Grodzinsky, A. J. ir Jain, R. K. (2000). Ekstraląstelinės matricos surinkimo vaidmuo tarpląsteliniame transporte esant kietiems navikams. Cancer Res. 60, 2497 ir#x020132503.

Nielsen, P. E., Egholm, M., Berg, R. H. ir Buchardt, O. (1991). Selektyvus DNR atpažinimas pakeitus grandinę timinu pakeistu poliamidu. Mokslas 254, 1497 ir#x020131500. doi: 10.1126/mokslas.1962210

Nishizaki, T., Iwai, S., Ohtsuka, E. ir Nakamura, H. (1997). RNR.2 ir#x02032-O-metilinto RNR hibridinio duplekso, kurio centre yra RNR.DNR hibridinis segmentas, tirpalo struktūra. Biochemija 36, 2577 ir#x020132585. doi: 10.1021/bi962297c

Obika, S., Nanbu, D., Hari, Y., Andoh, J.-I., Morio, K.-I., Doi, T. ir kt. (1998). Dvipusių, turinčių fiksuotą N tipo konformaciją, 2 ′-O, 4 ′-C-metileneribonukleozidus, stabilumas ir struktūrinės savybės. Tetraedras Lett. 39, 5401 ir#x020135404. doi: 10.1016/S0040-4039 (98) 01084-3

Pasternak, A. ir Wengel, J. (2011). Atrakinta nukleorūgštis ir#x02013 RNR modifikacija, turinti platų potencialą. Org. Biomol. Chem. 9, 3591 ir#x020133597. doi: 10.1039/c0ob01085e

Plenat, F., Klein-Monhoven, N., Marie, B., Vignaud, J. M. ir Duprez, A. (1995). Sintetinių oligonukleotidų pasiskirstymas ląstelėse ir audiniuose sveikose ir navikus turinčiose nuogose pelėse. Autoradiografinis, imunohistologinis ir tiesioginės fluorescencinės mikroskopijos tyrimas. Esu. J. Patolis. 147, 124 ir#x02013135.

Senn, J. J., Burel, S. ir Henry, S. P. (2005). Ne CpG turintys antisense 2 ir#x02032-metoksietiloligonukleotidai aktyvina priešuždegiminį atsaką, nepriklausomą nuo Toll tipo receptoriaus 9 arba mieloidinio diferenciacijos faktoriaus 88. J. Pharmacol. Galioj. Ther. 314, 972 ir#x02013979. doi: 10.1124/jpet.105.084004

Seong, J. H., Lee, K. M., Kim, S. T., Jin, S. E. ir Kim, C. K. (2006). Polietilenimino pagrindu pagaminti antisense IL-4 oligodeoksinukleotidai slopina IL-4 gamybą pelių kvėpavimo takų uždegimo modelyje. J. Gene Med. 8, 314 ir#x02013323. doi: 10.1002/jgm.848

Simoes, S., Filipe, A., Faneca, H., Mano, M., Penacho, N., Duzgunes, N. ir kt. (2005). Katijoninės liposomos, skirtos genams pristatyti. Eksperto nuomonė. Narkotikų pristatymas. 2, 237 ir#x02013254. doi: 10.1517/17425247.2.2.237

Srinivasanas, S. K., Tewary, H. K. ir Iversenas, P. L. (1995). Oligonukleotidų ir albumino surišimo vietų apibūdinimas, surišimo mastas ir vaistų sąveika. Antisense Res. Dev. 5, 131 ir#x02013139.

Stanton, R., Sciabola, S., Salatto, C., Weng, Y., Moshinsky, D., Little, J. ir kt. (2012). Antisense gapmers cheminio modifikavimo tyrimas. Nukleino rūgšties term. 22, 344 ir#x02013359. doi: 10.1089/nat.2012.0366

Stein, C. A., Hansen, J. B., Lai, J., Wu, S., Voskresenskiy, A., Hog, A. ir kt. (2010). Efektyvus genų nutildymas pristatant užrakintus nukleorūgšties antisense oligonukleotidus, kuriems nepadeda transfekcijos reagentai. Nucleic Acids Res. 38, e3. doi: 10.1093/nar/gkp841

Stessl, M., Marchetti-Deschmann, M., Winkler, J., Lachmann, B., Allmaier, G. ir Noe, C. R. (2009). Proteominis tyrimas atskleidžia nespecifinę apoptozės indukciją ir glikolitinių fermentų sumažėjimą fosforotioato antisense oligonukleotido oblimersenu žmogaus melanomos ląstelėse. J. Proteomika 72, 1019 ir#x020131030. doi: 10.1016/j.jprot.2009.06.001

Stewart, A. J., Pichon, C., Meunier, L., Midoux, P., Monsigny, M. ir Roche, A. C. (1996). Padidėjęs biologinis antisense oligonukleotidų, sujungtų su glikozilinto poli-L-lizino, aktyvumas. Mol. Pharmacol. 50, 1487 ir#x020131494.

Straarup, E. M., Fisker, N., Hedtjarn, M., Lindholm, M. W., Rosenbohm, C., Aarup, V. ir kt. (2010). Trumpi užrakinti nukleorūgšties antisense oligonukleotidai stipriai sumažina apolipoproteino B mRNR ir cholesterolio kiekį serume pelėms ir nežmoginiams primatams. Nucleic Acids Res. 38, 7100 ir#x020137111. doi: 10.1093/nar/gkq457

Summerton, J. ir Weller, D. (1997). Morpholino antisense oligomerai: dizainas, paruošimas ir savybės. Antisense nukleorūgšties vaistų kūr. 7, 187 ir#x02013195. doi: 10.1089/oli.1.1997.7.187

Van Vlerken, L. E., Vyas, T. K. ir Amiji, M. M. (2007). Poli (etilenglikolio) modifikuoti nanocentrai, skirti nukreipti į naviką ir tarpląstelinį. Pharm. Res. 24, 1405 ir#x020131414. doi: 10.1007/s11095-007-9284-6

Watanabe, T. A., Geary, R. S. ir Levinas, A. A. (2006). Antisensinio oligonukleotido, nukreipto į žmogaus ICAM-1, jungimasis prie plazmos baltymų (ISIS 2302). Oligonukleotidai 16, 169 ir#x02013180. doi: 10.1089/oli.2006.16.169

Watts, J. K. ir Corey, D. R. (2012). Ligos genų slopinimas laboratorijoje ir klinikoje. J. Patolis. 226, 365 ir#x02013379. doi: 10.1002/path.2993

Webb, M. S., Tortora, N., Cremese, M., Kozlowska, H., Blaquiere, M., Devine, D. V. ir kt. (2001). Fosforotioato oligonukleotido toksiškumas ir toksikokinetika cynomolgus beždžionių prieš onkogeną c-myc. Antisense nukleorūgšties vaistų kūr. 11, 155 ir#x02013163. doi: 10.1089/108729001300338681

Winkler, J., Stessl, M., Amartey, J. ir Noe, C. R. (2010). Nenumatytas poveikis, susijęs su nukleorūgščių fosforotioato modifikavimu. Chem. Med. Chem. 5, 1344 ir#x020131352. doi: 10.1002/cmdc.201000156

Wisse, E., Jacobs, F., Topal, B., Frederik, P. ir De Geest, B. (2008).Endotelio fenestrae dydis žmogaus kepenų sinusituose: poveikis hepatocitų nukreiptam genų perdavimui. Gene Ther. 15, 1193 ir#x020131199. doi: 10.1038/gt.2008.60

Wu, X. A., Choi, C. H., Zhang, C., Hao, L. ir Mirkin, C. A. (2014). Sferinių nukleorūgščių nanodalelių konjugatų tarpląstelinis likimas. J. Am. Chem. Soc. 136, 7726 ir#x020137733. doi: 10.1021/ja503010a

Yin, H., Kanasty, R. L., Eltoukhy, A. A., Vegasas, A. J., Dorkinas, J. R. ir Andersonas, D. G. (2014). Nevirusiniai vektoriai genų terapijai. Nat. Genet. 15, 541 ir#x02013555. doi: 10.1038/nrg3763

Zhang, C., Newsome, J. T., Mewani, R., Pei, J., Gokhale, P. C. ir Kasid, U. N. (2009). Sisteminis nanodalelių, turinčių antisense oligonukleotidų ir siRNR, pristatymas ir ikiklinikinis įvertinimas. Metodai Mol. Biol. 480, 65 ir#x0201383. doi: 10.1007/978-1-59745-429-2_5

Zhang, Y., Qu, Z., Kim, S., Shi, V., Liao, B., Kraft, P. ir kt. (2011). Sumažintas vėžio taikinių moduliavimas naudojant užrakintus nukleorūgšties (LNR) pagrindu veikiančius antisense oligonukleotidus be transfekcijos. Gene Ther. 18, 326 ir#x02013333. doi: 10.1038/gt.2010.133

Raktažodžiai: antisense, oligonukleotidai, vėžys, terapija, nanomedicina

Citata: Moreno PMD ir P êgo AP (2014) Terapiniai antisense oligonukleotidai nuo vėžio: kliūtis klinikai. Priekyje. Chem. 2: 87. doi: 10.3389/fchem.2014.00087

Gauta: 2014 m. Rugpjūčio 31 d. Laukiamas dokumentas: 2014 m. Rugsėjo 10 d
Priimta: 2014 m. Rugsėjo 23 d. Paskelbta internete: 2014 m. Spalio 14 d.

Jo ão Conde, Masačusetso technologijos institutas, JAV

Juewen Liu, Vaterlo universitetas, Kanada
Ramon Eritja, Institut de Qu ímica Avan 󧫚 de Catalunya - Consejo Superior de Investigaciones Cient ໟicas, Ispanija

Autorių teisės ir#x000A9 2014 m. „Moreno“ ir „P êgo“. Tai atviros prieigos straipsnis, platinamas pagal „Creative Commons Attribution License“ (CC BY) sąlygas. Leidžiama naudoti, platinti ar atgaminti kituose forumuose, su sąlyga, kad autorius (-ai) ar licencijos išdavėjas yra įskaitytas ir kad cituojamas originalus leidinys šiame žurnale pagal priimtą akademinę praktiką. Neleidžiama naudoti, platinti ar atgaminti, jei nesilaikoma šių sąlygų.